C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/10 (2006.01) A61K 48/00 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 15/62 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2424317
This invention utilizes a two-hybrid system to screen for agents that modulate the ability of a cell to degrade or to accumulate a metabolic product or to selective kill a cell or to selectively express a gene or cDNA in a cell that has a defect in its ability to degrade or to accumulate a metabolic product. One embodiment provides a mammalian cell comprising a nucleic acid encoding a peptide binding domain and an effector gene; a first chimeric protein comprising a nucleic acid binding domain that binds the peptide binding domain attached to the metabolic product or to a ligand that binds to the metabolic product; and a second chimeric protein comprising an expression control protein attached to the metabolic product or to the ligand that binds to the metabolic product such that when the first chimeric protein comprises the metabolic product, the second chimeric protein comprises the ligand and when the first chimeric protein comprises the ligand, the second chimeric protein comprises the metabolic product. The cell is contacted with a test agent and an alteration of expression of the effector gene is detected (if present) where a change in expression of the effector gene in response to the test agent indicates that the test agent modulates the ability of the cell to accumulate or degrade the metabolic product.
L'invention fait appel à un système double-hybride pour cribler des agents qui modulent la capacité d'une cellule à dégrader ou à accumuler un produit métabolique, ou à tuer de manière sélective une cellule ou à exprimer de manière sélective un gène ou un ADNc dans une cellule ayant un défaut dans sa capacité à dégrader ou à accumuler un produit métabolique. Selon un mode de réalisation de cette invention, on obtient une cellule mammifère comprenant un acide nucléique codant pour un domaine de liaison à un peptide et un gène effecteur, une première protéine chimère comprenant un domaine de liaison à un acide nucléique qui se lie au domaine de liaison à un peptide associé au produit métabolique ou à un ligand qui se lie au produit métabolique, et une seconde protéine chimère comprenant une protéine de régulation d'expression associée au produit métabolique ou au ligand qui se lie au produit métabolique, de manière que lorsque la première protéine chimère comprend le produit métabolique, la seconde protéine chimère comprenne le ligand, et lorsque la première protéine chimère comprend le ligand, la seconde protéine chimère comprenne le produit métabolique. La cellule est mise en contact avec un agent de test et une modification de l'expression du gène effecteur (s'il est présent) est détectée là où un changement d'expression du gène effecteur en réponse à l'agent test indique que ce dernier module la capacité de la cellule à accumuler ou à dégrader le produit métabolique.
Mccormick Frank
Tetsu Osamu
Wakita Kenichi
Fetherstonhaugh & Co.
The Regents Of The University Of California
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-2067644