C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/62 (2006.01) C07K 14/435 (2006.01) C07K 14/47 (2006.01) C07K 19/00 (2006.01) C12N 15/12 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)
Patent
CA 2175209
Molecules comprise (i) a polypeptide (such as calmodulin) which has calcium-dependent binding affinity for ligand and (ii) another polypeptide, the polypeptides preferably being joined by a peptide bond and produced by recombinant expression from a gene fusion. The molecules are useful in detection, immobilisation, targeting and purification, cell-labeling and band-shift assays for determining binding of a member of a specific binding pair (sbp) for complementary sbp member. For purposes of band-shift assays, polypeptide (i) need not have calcium-dependent binding affinity for a ligand, but should have a dissociation constant for a ligand of 10nM or less, measured at a pH of between 6 and 9 at 20 °C. In an alternative alternative embodiment, a calcium-binding polypeptide which is, or is derived from, mastoparan is joined, as polypeptide (i) instead of a binding polypeptide, to the other polypeptide.
Des molécules comprenant (i) un polypeptide (tel que calmoduline) qui présente une affinité de liaison dépendante de calcium avec un ligand, et (ii) un autre polypeptide de préférence rattaché au premier par une liaison peptidique, les deux polypeptides étant produits par expression recombinante à partir d'une fusion de gènes. Ces molécules s'utilisent pour la détection, l'immobilisation, le ciblage et la purification, le marquage de cellules, ainsi que pour des dosages par déplacement de bande permettant de déterminer la liaison d'un élément faisant partie d'une paire d'éléments à liaison spécifique (sbp) avec un élément de sbp complémentaire. Lorsqu'il s'agit d'effectuer un dosage par déplacement de bande, le polypeptide (i) ne doit pas nécessairement présenter une affinité de liaison dépendante de calcium avec un ligand, mais devrait présenter une constante de dissociation ne dépassant pas 10nM par rapport à un ligand, mesurée à un ph compris entre 6 et 9 à 20 ~C. Selon une variante, un polypeptide de liaison de calmoduline composé ou dérivé de mastoparan est utilisé comme polypeptide (i) au lieu d'un polypeptide de liaison pour être rattaché à l'autre polypeptide.
de Lalla Claudia
Neri Dario
Winter Gregory Paul
Bereskin & Parr
Medical Research Council
LandOfFree
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