G - Physics – 01 – N
Patent
G - Physics
01
N
G01N 33/52 (2006.01) C12Q 1/06 (2006.01) G01N 21/64 (2006.01) G01N 33/53 (2006.01) G01N 33/543 (2006.01)
Patent
CA 2256629
In a process for the quantitative optical analysis of fluorescently labelled biological cells 5, a cell layer on a transparent support at the bottom 2 of a reaction vessel 1 is in contact with a solution 3 containing the fluorescent dye 4. The sensitivity of analytical detection can be considerably improved if to the fluorescent dye 4 already present in addition a masking dye 9, which absorbs the excitation light 6 for the fluorescent dye 4 and/or its emission light 7, is added to the solution 3 and/or if a separating layer 10 permeable to the solution and absorbing and/or reflecting the excitation light 6 or the emission light 7 is applied to the cell layer at the bottom 2. This process can also be used for improving the sensitivity in the quantitative optical analysis of a luminescent biological cell layer. The separating layer 10 must in this case be composed such that it has a high power of reflection for the luminescent light 11. Analogously, these process principles can also be used in receptor studies for the masking of the interfering background radiation in the quantitative optical analysis of fluorescently or luminescently labelled reaction components. In this case, a receptor layer 12 at the bottom 2 of a reaction vessel 1 is in contact with a solution (supernatant 3) in which a fluorescent or luminescent ligand 13 is dissolved. The sensitivity and accuracy of the analytical detection can be considerably improved here if a masking dye 9 which absorbs the excitation light 6 for the fluorescent dye and/or its emission light or (in the case of luminescent ligands) the luminescent light is added to the supernatant 3. Instead of the masking dye in the solution 3 or optionally as an additional measure, a separating layer 10 permeable to the solution 3 and absorbing and/or reflecting the excitation light 6 and/or the emission light or the luminescent light can be applied to the cell or receptor layer 12 at the bottom 2.
Selon un procédé d'analyse optique quantitative de cellules biologiques (5) marquées par fluorescence, une couche cellulaire est placée sur un support transparent au fond (2) d'un réacteur (1) de façon à être en contact avec une solution (3) contenant le colorant fluorescent (4). Il est possible d'améliorer considérablement la sensibilité de la détection analytique, si l'on ajoute à la solution (3) un colorant de masquage (9) qui absorbe la lumière d'excitation (6), destinée au colorant fluorescent (4) déjà présent dans la solution (3), et/ou sa lumière émise (7), et/ou si l'on applique, sur la couche cellulaire au fond (2) du réacteur, une couche de séparation (10) perméable à la solution, absorbant et/ou réfléchissant la lumière d'excitation (6) ou la lumière émise (7). Ce procédé peut également être appliqué pour améliorer la sensibilité lors de l'analyse optique quantitative d'une couche cellulaire biologique luminescente. Dans ce cas, la couche de séparation (10) doit être conçue de manière à présenter un facteur de réflexion élevé pour la lumière luminescente (11). De façon analogue, ces principes peuvent être appliqués également pour des études de récepteur afin de masquer le rayonnement d'arrière plan gênant lors de l'analyse optique quantitative de partenaires de réaction marqués par fluorescence ou par luminescence. Dans ce cas, une couche de récepteur (12) est placée au fond (2) d'un réacteur (1) de façon à être en contact avec une solution (surnageant 3) dans laquelle est dissous un ligand fluorescent ou luminescent (13). Il est possible d'améliorer considérablement la sensibilité et la précision de la détection analytique, si l'on ajoute au surnageant (3) un colorant de masquage (9) qui absorbe la lumière d'excitation (6), destinée au colorant fluorescent, et/ou sa lumière émise (7) ou bien (dans le cas de ligands luminescents) la lumière luminescente. A la place du colorant de masquage dans la solution (3) ou le cas échéant en tant qu'opération supplémentaire, on peut appliquer, sur la couche cellulaire ou sur la couche de récepteur (12), au fond (2) du réacteur, une couche de séparation (10) perméable à la solution (3), absorbant et/ou réfléchissant la lumière d'excitation (6) et/ou la lumière émise ou la lumière luminescente.
Bechem Martin
Krahn Thomas
Paffhausen Wolfgang
Schade Andreas
Schmidt Delf
Aktiengesellschaft Bayer
Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft
Fetherstonhaugh & Co.
LandOfFree
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