C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/864 (2006.01)
Patent
CA 2386722
The invention provides a method for producing purified replication-defective recombinant AAV virions. The method comprises introducing into a suitable host cell an AAV vector, an AAV helper construct and an adenoplasmid accessory construct into the host cell. The adenoplasmid accessory plasmid is composed adenovirus plasmid DNA unable to be packaged into adenoviral particles because it lacks packaging signal sequence(s) or it contains additional sequences making it too large to package. The host cell is cultured to produce crude rAAV virions and then lysed. The resulting cell lysate is applied to a chromatographic column containing sulfonated cellulose or subjected to cesium chloride equilibrium gradient centrifugation and the purified rAAV virions are recovered.
L'invention concerne un procédé relatif à la production de virions AAV de recombinaison purifiés à déficience de réplication, qui consiste à introduire dans une cellule hôte appropriée un vecteur AAV, un produit de synthèse assistant AAV et un produit de synthèse adénoplasmide accessoire. Le plasmide adénoplasmide accessoire est composé d'ADN de plasmide d'adénovirus impossible à empaqueter dans des particules adénovirales car ne possédant pas de séquence(s) de signaux d'empaquetage ou parce que ces particules contiennent des séquences additionnelles leur conférant une taille trop importante pour l'empaquetage. On met en culture la cellule hôte pour produire des virions rAAV bruts, et la cellule est ensuite soumis à une lyse. Le lysat de cellule résultant est appliqué à une colonne de chromatographie renfermant de la cellulose sulfonée ou soumis à une centrifugation à gradient d'équilibre au chlorure de césium, et on peut ainsi récupérer les virions rAAV purifiés.
Dwarki Varavani
Escobedo Jaime
Ladner Martha
Zhou Shang-Zhen
Borden Ladner Gervais Llp
Chiron Corporation
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1387110