C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/85 (2006.01) A61K 31/00 (2006.01) A61K 31/54 (2006.01) A61K 31/5415 (2006.01) A61P 25/28 (2006.01) C07K 14/47 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) C12N 15/09 (2006.01) C12P 21/00 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)
Patent
CA 2434067
Disclosed are methods of proteolytically converting a precursor protein (e.g. tau) to a product fragment (e.g. a 12 kd fragment) in a stable cell line, wherein the precursor protein is associated with a disease state in which the precursor protein aggregates pathologically (e.g. a tauopathy), and the methods comprise:(a) providing a stable cell line transfected with nucleic acid encoding: (i) a template fragment of the precursor protein such that the template fragment is constitutively expressed in the cell at a level which is not toxic to the cell; and (ii) the precursor protein, which protein is inducibly expressed in the cell in response to a stimulus, whereby interaction of the template fragment with the precursor protein causes a conformational change in the precursor protein such as to cause aggregation and proteolytic processing of the precursor protein to the product fragment. The method is preferably used to screen for modulators of the aggregation process by monitoring production (or modulation of production) of the product band or bands. Also provided are materials for used in the assays, plus medicaments, and related uses and processes, based on compounds which show high activity in the assay of the invention e.g. reduced diaminophenothiazines.
L'invention concerne des méthodes permettant de transformer de manière protéolytique une protéine précurseur (par exemple, tau) en un fragment de produit (par exemple, un fragment 12 kd) dans une lignée cellulaire stable, la protéine précurseur étant associée à un état pathologique dans lequel la protéine précurseur s'accumule de manière pathologique (par exemple, une tauopathie). Les méthodes décrites dans cette invention consistent:(a) à fournir une lignée cellulaire stable transfectée avec un acide nucléique codant pour: (I) un fragment modèle de la protéine précurseur, de telle sorte que ce fragment modèle soit exprimé de manière constitutive dans la cellule à un niveau qui n'est pas toxique pour la cellule; et (ii) la protéine précurseur, laquelle est exprimée par induction dans la cellule sous l'effet d'un stimulus, l'interaction du fragment modèle et de la protéine précurseur entraînant une modification de conformation de la protéine précurseur telle que cela provoque l'accumulation et la transformation protéolytique de la protéine précurseur en un fragment de produit. Cette méthode est, de préférence, utilisée pour cribler des modulateurs du processus d'agrégation par contrôle de la production (ou par modulation de la production) de la bande ou des bandes de produits. La présente invention concerne également des matériaux utilisables lors des essais biologiques, et des médicaments, ainsi que des utilisations et des processus associés, fondés sur des composés présentant une activité élevée dans l'essai biologique décrit dans cette invention, par exemple des diaminophénothiazines réduites.
Harrington Charles Robert
Horsley David
Rickard Janet Elizabeth
Wischik Claude Michel
Gowling Lafleur Henderson Llp
The University Court Of The University Of Aberdeen
Wista Laboratories Ltd.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1685826