Measuring g protein coupled receptor activation

Details Measuring g protein coupled receptor activation Measuring g protein coupled receptor activation

G - Physics

01

N

G01N 33/53 (2006.01) C07K 14/705 (2006.01) C12N 15/09 (2006.01) G01N 21/64 (2006.01) G01N 21/76 (2006.01)

Patent

CA 2748500

The present invention relates to methods and polypeptides for detecting a compound in a sample. In particular, the present invention relates to the use of a cell- free composition comprising at least one G protein coupled receptor embedded in a lipid bilayer which when expressed in a cell the N-terminus of the G protein coupled receptor, or subunits thereof, is outside the cell and the C-terminus is inside the cell, and which is capable of binding the compound. Optionally, the composition also comprises at least one accessory molecule that directly or indirectly binds an intracellular loop and/or the C-terminus of the G protein coupled receptor. The G protein coupled receptor, and/or accessory molecule when present, in combination comprise a bioluminescent protein and an acceptor molecule, which enables bioluminescent resonance energy transfer (BRET) to be used to detect the compound binding the receptor.

L'invention concerne des procédés et des polypeptides destinés à détecter un composé dans un échantillon. En particulier, la présente invention concerne l'utilisation d'une composition acellulaire comprenant au moins un récepteur couplé aux protéines G incorporé dans une bicouche lipidique qui, lorsqu'elle est exprimée dans une cellule, l'extrémité N terminale du récepteur étant couplée aux protéines G, ou à ses sous-unités, est en dehors de la cellule, et l'extrémité C terminale est à l'intérieur de la cellule, et qui peut lier le composé. Éventuellement, la composition comprend également au moins une molécule accessoire qui lie directement ou indirectement une boucle intracellulaire et/ou l'extrémité C terminale du récepteur couplé aux protéines G. Le récepteur couplé aux protéines G, et/ou la molécule accessoire, lorsqu'elle est présente, comprennent en combinaison une protéine bioluminescente et une molécule acceptrice, ce qui permet d'utiliser le transfert d'énergie bioluminescente par résonance (BRET) pour détecter le composé liant le récepteur.

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