C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2623310
Disclosed is a single stranded primer-pronioter-selector construct comprising (in 3' to 5' orientation) a primer subsequence annealing to the target, a T7 or other promoter subsequence (the template strand), and a selector subsequence. The primer can be extended by template mediated elongation, including reverse transcription, or ligation to another oligonucleotide. The promoter sequence is oriented to direct the in-vitro transcription (IVT) opposite to that of primer extension, where the selector subsequence serves as a template for IVT. The selector is associated with the target subsequence of interest and it, and the amplified product are unique subsequences, dissimilar to other sequence present in the sample. The constructs is useful for determination of the presence and relative abundance of designated subsequences in the sample, multiplex gene expression analysis, multiplex allele counting, determination of polymorphic/mutation site, and loss of heterozygosity.
L'invention concerne une construction sélecteur-promoteur-amorce monocaténaire comprenant (suivant une orientation 3' à 5') une sous-séquence amorce qui s'hybride avec la cible, une sous-séquence promoteur T7 ou autre (le brin complémentaire), et une sous-séquence sélecteur. L'amorce peut être allongé par élongation induite par brin monocaténaire, y compris par transcription inverse, ou par ligature avec un autre oligonucléotide. La séquence promoteur est orientée de façon à placer la transcription in vitro à l'opposé de celle de l'extension de l'amorce, la sous-séquence sélecteur servant de brin complémentaire pour la transcription in vitro. Le sélecteur est associé à la sous-séquence cible présentant un intérêt, le sélecteur et le produit amplifié étant des sous-séquences uniques, différentes d'autres séquences présentes dans l'échantillon. Les constructions de l'invention sont utiles pour détecter la présence et l'abondance relative de sous-séquences définies dans l'échantillon, pour l'analyse de l'expression génétique multiplex, le décompte d'allèles multiplex, la détermination du site de mutation/polymorphe, et la perte de l'hétérozygotie.
Korzheva Nataliya
Seul Michael
Bioarray Solutions Ltd.
Borden Ladner Gervais Llp
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1996979