C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/81 (2006.01) C07K 16/18 (2006.01) C12N 1/16 (2006.01) C12N 9/12 (2006.01) C12N 9/90 (2006.01) C12N 15/54 (2006.01) C12N 15/61 (2006.01) C12P 21/00 (2006.01)
Patent
CA 2751730
Lower eukaryotic cells such as Pichia pastoris that normally cannot use galactose as a carbon source but which have been genetically engineered according to the methods herein to use galactose as a sole source of carbon are described. The cells are genetically engineered to express several of the enzymes comprising the Leloir pathway. In particular, the cells are genetically engineered to express a galactokinase, a UDP-galactose-C4-epimerase, and a galactose-1-phosphate uridyltransferase, and optionally a galactose permease. In addition, a method is provided for improving the yield of glycoproteins that have galactose-terminated or -containing N-glycans in cells that have been genetically engineered to produce glycoproteins with N-glycans having galactose residues but which normally lack the enzymes comprising the Leloir pathway comprising transforming the cells with one or more nucleic acid molecules encoding a galactokinase, a UDP-galactose-C4-epimerase, and a galactose-1-phosphate uridyltransferase. The methods and host cells described enable the presence or lack of the ability to assimilate galactose as a selection method for making recombinant cells. The methods and host cells are shown herein to be particularly useful for making immunoglobulins and the like that have galactose-terminated or containing N-glycans.
L'invention porte sur des cellules eucaryotes inférieures telles que Pichia pastoris qui ne peuvent normalement pas utiliser du galactose en tant que source de carbone mais qui ont été génétiquement modifiées selon les procédés décrits ici afin d'utiliser le galactose en tant que source unique de carbone. Les cellules sont génétiquement modifiées pour exprimer plusieurs des enzymes comprenant la voie de Leloir. En particulier, les cellules sont génétiquement modifiées pour exprimer une galactokinase, une UDP-galactose-C4-épimérase, et une galactose-1-phosphate uridyltransférase, et facultativement une galactose perméase. De plus, l'invention porte sur un procédé pour améliorer la production de glycoprotéines qui ont des N-glycanes à terminaison galactose ou contenant du galactose dans des cellules qui ont été génétiquement modifiées pour produire des glycoprotéines avec des N-glycanes ayant des résidus galactose mais qui n'ont normalement pas d'enzymes comprenant la voie de Leloir, comprenant la transformation des cellules par une ou plusieurs molécules d'acide nucléique codant pour une galactokinase, une UDP-galactose-C4-épimérase et une galactose-1-phosphate uridyltransférase. Les procédés et les cellules hôtes décrits font de la présence ou de l'absence de capacité d'assimilation de galactose un procédé de sélection pour produire des cellules recombinantes. Les procédés et cellules hôtes sont démontrés ici être particulièrement utiles pour produire des immunoglobulines et similaires qui ont des N-glycanes à terminaison galactose ou contenant du galactose.
Bobrowicz Piotr
Davidson Robert C.
Zha Dongxing
Gowling Lafleur Henderson Llp
Merck Sharp & Dohme Corp.
LandOfFree
Metabolic engineering of a galactose assimilation pathway in... does not yet have a rating. At this time, there are no reviews or comments for this patent.
If you have personal experience with Metabolic engineering of a galactose assimilation pathway in..., we encourage you to share that experience with our LandOfFree.com community. Your opinion is very important and Metabolic engineering of a galactose assimilation pathway in... will most certainly appreciate the feedback.
Profile ID: LFCA-PAI-O-1687070