C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/11 (2006.01) C12N 15/01 (2006.01)
Patent
CA 2546698
A method for enriching the GC base pair content of a DNA molecule the method comprising the steps of (a) providing a DNA template molecule in which at least some of the A residues are base paired with U residues and (b) replicating the DNA template molecule provided in step (a) under conditions in the replication reaction medium in which at least some of the U residues base pair with a G residue. Typically, the DNA template molecule in (a) is produced by replicating a first template DNA molecule in the presence of dUTP so that at least some of the T residues of the first template are replaced by U residues to form a second template molecule. Thus, a preferred method comprises the steps of (1) providing a first template DNA molecule, (2) replicating the first template DNA molecule in the presence of dUTP so that at least some of the T residues of the first template are replaced by U residues to form a second template molecule and (3) replicating the DNA template molecule produced in step (2) under conditions in the replication reaction medium in which at least some of the U residues base pair with a G residue. The invention also includes a method for making a mutant polypeptide with altered properties compared to the polypeptide encoded by a DNA molecule, the method comprising (a) providing a DNA molecule encoding a polypeptide of interest, (b) enriching the GC base pair content of the DNA molecule according to the method set out above, (c) expressing the polypeptide encoded by the DNA molecule whose GC base pair content has been enriched and (d) selecting a polypeptide with altered properties. The invention also includes A mutant A1bD polypeptide wherein Ser40 has been replaced by another amino acid residue.
La présente invention concerne un procédé permettant d'enrichie le contenu de la paire de base GC d'une molécule d'ADN. Ce procédé comporte plusieurs opérations. On commence (a) par se procurer une molécule gabarit d'ADN dans laquelle certains des résidus A sont appariés par la base avec les résidus U. On procède ensuite (b) à la réplication de la molécule gabarit d'ADN de l'opération précédente, dans des conditions du milieu de réaction de réplication dans lesquelles quelques-uns au moins des résidus U s'apparient par la base avec un résidu G. Généralement, la molécule gabarit d'ADN de (a) est produite par réplication d'une première molécule d'ADN gabarit en présence de dUTP de façon que quelques-uns au moins des résidus T du premier gabarit soient remplacés par des résidus U pour former une deuxième molécule gabarit. Il en découle un procédé préféré comprenant les opérations suivantes. On commence (1) par se procurer une première molécule d'ADN gabarit. On procède ensuite à la (2) réplication de la première molécule d'ADN gabarit en présence de dUTP, de façon que quelques uns au moins des résidus T du premier gabarit soient remplacés par des résidus U pour former une deuxième molécule gabarit, puis à la (3) réplication de la molécule gabarit d'ADN de l'opération précédente (2) dans des conditions du milieu de réaction de réplication dans lesquelles quelques-uns au moins des résidus U s'apparient par la base avec un résidu G. L'invention concerne également un procédé permettant de faire un polypeptide mutant aux propriétés altérées par comparaison avec le polypeptide codé par une molécule d'ADN. Pour ce procédé, on commence par (a) se procurer une molécule d'ADN codant un polypeptide à étudier. On (b) enrichit ensuite le contenu de la paire de base GC de la molécule d'ADN selon le procédé précédemment décrit. On (c) exprime le polypeptide codé par la molécule d'ADN dont le contenu de la paire de base GC a été enrichi. On conclut en (d) sélectionnant un polypeptide aux propriétés altérées. L'invention concerne enfin un polypeptide A1bD mutant A dans lequel Ser40 a été remplacé par un autre résidu d'acide aminé.
Hong Yuzhi
Liu Ziduo
Zhang Lianhui
Agency For Science Technology And Research
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1530294