C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/10 (2006.01) C12P 21/02 (2006.01) G01N 33/543 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)
Patent
CA 2458227
A method for presenting a target protein or an array of target proteins for analysis is disclosed. The method includes the steps of forming a coding sequence; placing the coding sequence and protein-synthesis components capable of expressing the target protein under selected protein-synthesis conditions in a well on a substrate, the well having a surface which has been functionalized with the second coil-forming peptide; expressing said coding sequence under such conditions, wherein the target protein so synthesized binds to the well through coil-coil heterodimer formation, and is thus presented for analysis in the well in captured form; and washing said well to remove unbound components. The coding sequence includes a first nucleic acid sequence which encodes a first coil-forming peptide having a selected charge and being capable of interacting with a second, oppositely charged coil- forming peptide to form a stable .alpha.-helical coiled-coil heterodimer; and a second nucleic acid sequence encoding the target protein. Also disclosed are kits for use in practicing the method.
L'invention concerne un procédé de présentation d'une protéine cible ou d'un réseau de protéines cibles aux fins d'analyse. Le procédé comprend les étapes consistant à former une séquence de codage; à placer la séquence de codage et les composants de synthèse de protéine capables d'exprimer la protéine cible dans des conditions de synthèse de protéine sélectionnées dans un puits sur un substrat, le puits présentant une surface fonctionnalisée par le second peptide formant une hélice; à exprimer ladite séquence de codage dans de telles conditions, la protéine cible ainsi synthétisée se liant au puits par formation d'un hétérodimère hélice-hélice et étant ainsi présentée aux fins d'analyse dans le puits sous forme capturée; et à laver ledit puits, de manière à éliminer des composants non liés. La séquence de codage comprend une première séquence d'acide nucléique codant un premier peptide formant une hélice présentant une charge sélectionnée et étant capable d'interagir avec un second peptide à charge opposée et formant une hélice, de manière à former un hétérodimère stable à super enroulements (coiled-coil) .alpha.-hélicoïdaux; et une seconde séquence d'acide nucléique codant la protéine cible. L'invention concerne également des kits à utiliser dans la mise en oeuvre du procédé.
Chao Heman
Mcelroy Jerry
Segal Donald
Tian Baomin
Wong Wah Y.
Gowling Lafleur Henderson Llp
Helix Biopharma Corporation
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1357962