C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/10 (2006.01) C07H 21/00 (2006.01)
Patent
CA 2243829
The invention concerns a method and device for the rapid, simultaneous isolation of genomic desoxyribonucleic acid (DNA) and cellular total ribonucleic acid (RNA), free of genomic DNA from various starting materials. The fields of application are molecular biology, biochemistry, gene technology (in particular gene therapy), medicine, biomedical diagnosis, veterinary medicine, food analysis and all related fields. The method proposed is characterized in that materials containing DNA and RNA are lysed in a special buffer, the lysate incubated with a mineral carrier, the carrier with the DNA bound to it separated off and washed with buffer solution, and the DNA subsequently separated from the carrier with a buffer of lower salt concentration. The lysate left after separating off the DNA bound to the carrier is mixed with phenol, chloroform and sodium acetate in defined proportions, the phases allowed to separate, and the total RNA precipitated from the aqueous phase by adding isopropanol. Lysis is carried out using buffers containing chaotropic salts with a high ionic strength. Lysis of the material and bonding of the genomic DNA to the carrier are both carried out in the same buffer. Both the lysis of the starting material and all necessary washing steps are carried out in an apparatus which makes it possible to process 12 samples in parallel.
L'invention concerne un procédé et un dispositif pour l'isolement simultané et rapide de l'acide désoxyribonucléique (AND) génomique et de l'acide ribonucléique (ARN) cellulaire total, exempt d'ADN génomique, à partir de divers matériaux de départ. On mentionne comme domaines d'application la biologie moléculaire, la biochimie, le génie génétique, en particulier la thérapie génique, la médecine, le diagnostic biomédical, la médecine vétérinaire, l'analyse des denrées alimentaires et autres domaines apparentés. Le procédé selon l'invention est caractérisé en ce que les matériaux renfermant l'ADN et l'ARN sont lysés par un tampon spécial, le lysat pour l'isolement de l'ADN génomique est incubé avec un support minéral, le support avec l'ADN lié à celui-ci est séparé, puis lavé avec une solution tampon, après quoi l'ADN est séparé du support par un tampon de plus faible concentration en sel. Le lysat obtenu après séparation de l'ADN fixé au support est mélangé à des quantités déterminées de phénol, chloroforme et acétate de sodium et, après séparation des phases, l'ARN total est précipité de la phase aqueuse par addition d'isopropranol. La lyse est effectuée en utilisant des tampons renfermant des sels chaotropiques de force ionique élevée. La lyse du matériau et la liaison de l'ADN génomique au support sont effectuées chacune par le même tampon. Aussi bien la lyse du matériau de départ, que toutes les étapes nécessaires de lavage s'effectuent dans un dispositif, permettant ainsi de réaliser le traitement en parallèle de 12 échantillons.
Bendzko Peter
Hillebrand Timo
Invitek Gmbh
Kirby Eades Gale Baker
LandOfFree
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