C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2290510
The invention relates to a method for detecting DNA mutations using restriction enzymes. One condition to implement said method is that the cleaving performance of the selected restriction enzyme changes due to mutation. The relevant DNA segment in the genome containing the mutation is multiplied by means of polymerase chain reaction (PCR), wherein the primers used can each be labeled. The first primer enables the segment to be bonded to the surface of the carrier; the label of the second primer is used to enable detection. A restriction enzyme is incubated with the PCR amplicon, wherein the mutated segment is not cleaved if the cleavage site is suppressed by mutation. After the segments are bonded to the surface of the carrier, a detection reaction takes place, wherein the marking label of the second primer is removed in the wild type, insofar as it can be identified in the mutant. A plurality of labels enabling direct or indirect detection is possible. This provides a rapid method for detecting specific mutations in the genome without resorting to complex conventional methods.
L'invention concerne un procédé offrant la possibilité de détecter des mutations dans des ADN à l'aide d'enzymes de restriction, l'hypothèse étant qu'à cette occasion, la tenue à la coupure de l'enzyme de restriction choisie se modifie en raison de la mutation. Le segment d'ADN correspondant dans le génome, qui contient la mutation, est dupliqué par amplification en chaîne par polymérase (ACP), les amorces utilisées étant respectivement marquées. La première amorce permet la fixation du segment sur une surface porteuse, le marqueur de la deuxième amorce étant utilisé pour permettre la détection. Une enzyme de restriction est incubée avec l'amplicon obtenu par ACP, le segment muté n'étant pas coupé si le site de coupure est supprimé par la mutation. Une réaction de détection intervient après la fixation des segments sur une surface porteuse, et le marqueur de la deuxième amorce est éliminé dans le type sauvage, tandis qu'on peut l'identifier chez le mutant. On peut donc avoir une pluralité de marqueurs qui permettent une détection directe ou indirecte. On dispose ainsi d'un procédé rapide pour déceler certaines mutations dans le génome sans devoir recourir à des méthodes traditionnelles dispendieuses.
Bilitewski Ursula
Kuhlmeier Dirk
Gesellschaft Fur Biotechnologische Forschung Mbh (gbf)
Macrae & Co.
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1462255