C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 5/10 (2006.01) B01L 3/00 (2006.01) C12N 15/09 (2006.01) C12N 15/85 (2006.01) C12P 21/02 (2006.01)
Patent
CA 2604398
It is intended to provide a method of releasing the transcriptional regulation caused by a repeated sequence in a gene, a kit therefor and so on to thereby establish a system capable of producing a protein in a large amount. The above-described method can be achieved by any one or more of the following methods: (a) in the amplification of a gene encoding a target protein, co-amplifying a polynucleotide of 10kbp or more such as a X-phage DNA or an insulator sequence; (b) selecting by culturing cells having undergone gene amplification in media containing a drug with a gradual increase in concentration; (c) elevating the promoter activity of inducing the expression of a gene encoding a target protein; (d) excising an amplified gene region from a chromosome with the use of Cre-LoxP System; (e) treating cells having undergone gene amplification with 5-aza-2'-deoxycytidine to thereby lower the methylation degree of DNA; and (f) selecting the mammalian cells having undergone gene amplification on double minute chromosomes.
L'invention vise à fournir une méthode éliminant l'inhibition transcriptionnelle induite par une séquence répétée dans un gène et une trousse, le but visé étant de mettre au point un système capable de produire une protéine en grande quantité. La méthode décrite comprend l'une ou plusieurs des méthodes suivantes : a) amplifier un gène codant une protéine cible et co-amplifier un polynucléotide d'au moins 10 kpb comme l'ADN du phage lambda ou un isolateur; b) sélectionner des cellules contenant un gène ayant subi une amplification par une mise en culture dans un milieu contenant un médicament, dont on diminue graduellement la concentration; c) stimuler l'activité du promoteur induisant l'expression d'un gène codant une protéine cible; d) exciser le gène amplifié du chromosome à l'aide du système Cre-LoxP; e) traiter les cellules ayant subi une amplification de gène avec de la 5-aza-2'-deoxycytidine pour abaisser le degré de méthylation de l'ADN; et f) choisir des cellules de mammifère ayant subi une amplification de gène sur des chromosomes minuscules doubles.
Macpherson Leslie & Tyerman Llp
National University Of Corporation Hiroshima University
LandOfFree
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