Method and kit for primer based amplification of nucleic acids

Details Method and kit for primer based amplification of nucleic acids Method and kit for primer based amplification of nucleic acids

C - Chemistry, Metallurgy

12

P

C12P 19/34 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2542787

Disclosed is a novel method for diagnosis or differential diagnosis of disease agents and secondary disease agents. The method disclosed uses a novel amplification strategy termed TemPCR to allow sensitive and specific amplification of target sequences from any disease agents and/or secondary disease agent whose nucleic acid sequence is known. The TemPCR method utilizes at least one set of target enrichment primers specific for the disease agent or secondary disease agent to be detected (present at a low concentration) and at least one pair of shared target amplification primers (present at high concentrations). At least one pair of said target enrichment primers comprises a binding sequence for the target amplification primers. Therefore, the use of the TemPCR method allows multiplex amplification reactions to be carried out without the need for empirical optimization of the multiplex amplification parameters. Methods for nucleic acid isolation and the detection of the target sequences are also disclosed for use with the TemPCR method.

Cette invention se rapporte à un nouveau procédé de diagnostic ou de diagnostic différentiel d'agents pathologiques et d'agents pathologiques secondaires. Ce procédé utilise une nouvelle stratégie d'amplification appelée TemPCR, pour permettre l'amplification sensible et spécifique de séquences cibles provenant d'agents pathologiques et/ou d'agents pathologiques secondaires dont la séquence d'acides nucléiques est connue. Le procédé TemPCR utilise au moins un groupe d'amorces d'enrichissement de cibles, spécifiques de l'agent pathologique ou de l'agent pathologique secondaire devant être détecté (présent à une faible concentration) et au moins une paire d'amorces d'amplification de cibles partagées (présentes à des concentrations élevées). Au moins une paire de ces amorces d'enrichissement de cibles comprend une séquence de liaison pour les amorces d'amplification de cibles. Ainsi, l'utilisation du procédé TemPCR permet d'effectuer des réactions d'amplification multiplex sans qu'il soit nécessaire de recourir à une optimisation empirique des paramètres d'amplification multiplex. Cette invention concerne également des procédés d'isolation d'acides nucléiques et de détection de séquences cibles, à utiliser avec ce procédé TemPCR.

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