C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2385652
The invention relates to a method for the detection of microorganism relevant to brewing, as well as to nucleic acids and combinations thereof which can be used in this method. The invention further relates to the use of the nucleic acids according to the invention or combinations thereof for the detection and/or for the identification and/or characterisation of different genera or species of microorganisms relevant to brewing. Hence the problem to be solved by the present invention was to provide a method and means which make possible a rapid test of beer and brewing raw materials for contamination with micro-organisms, the test being required to detect the whole range of possible beer-contaminating microorganisms. This problem is solved according to the invention by a method which comprises the following steps: (a) bringing the sample into contact with a combination of at least two first nucleic acid molecules (primers), which hybridise with a region of a microbial nucleic acid conserved in microorganisms relevant to brewing; (b) amplification of the microbial nucleic acid or a portion thereof to produce at least one amplification fragment; (c) bringing the amplification fragments obtained in step (b) into contact with at least one second nucleic acid molecule (probe), which specifically hybridises with at least one amplification fragment that comprises a sequence of the microbial nucleic acid specific for all microorganisms relevant to brewing or for one or several families, genera or species of microorganisms relevant to brewing; and (d) detection of at least one hybrid nucleic acid which consists of an amplification fragment and a second nucleic acid molecule introduced in step (c). Further, nucleic acids are provided, which can be used in the method according to the invention.
L'invention concerne un procédé servant à déterminer la présence de micro-organismes présentant un intérêt dans le domaine de la brasserie, ainsi que des acides nucléiques et des combinaisons de ces derniers, pouvant être utilisés lors de la mise en oeuvre de ce procédé. L'invention concerne en outre l'utilisation de ces acides nucléiques et combinaisons de ces derniers pour déterminer la présence de différents genres ou espèces de micro-organismes présentant un intérêt dans le domaine de la brasserie et/ou pour les identifier et/ou les caractériser. L'invention vise à créer un procédé et des moyens permettant de réaliser un test rapide afin de déterminer si des micro-organismes ont contaminé de la bière ou des matières premières de brasserie, ledit test devant mettre en évidence la présence de toute la gamme des micro-organismes risquant de contaminer la bière. A cet effet, le procédé selon l'invention comprend les étapes suivantes : (a) mise en contact de l'échantillon avec une combinaison d'au moins deux premières molécules d'acide nucléique (amorces) qui réalisent une hybridation avec une région d'un acide nucléique microbien, conservée dans des micro-organismes présentant un intérêt dans le domaine de la brasserie ; (b) amplification de l'acide nucléique microbien ou d'une partie de ce dernier pour produire au moins un fragment d'amplification ; (c) mise en contact des fragments d'amplification, obtenus à l'étape (b), avec au moins une deuxième molécule d'acide nucléique (sonde) qui réalise une hybridation spécifique avec au moins un fragment d'amplification qui comprend une séquence de l'acide nucléique microbien, spécifique de tous les micro-organismes présentant un intérêt dans le domaine de la brasserie ou spécifique d'une ou plusieurs familles, d'un ou plusieurs genres ou d'une ou plusieurs espèces de micro-organismes présentant un intérêt dans le domaine de la brasserie ; et (d) mise en évidence d'au moins un acide nucléique hybride constitué d'un fragment d'amplification et d'une deuxième molécule d'acide nucléique introduite à l'étape (c). L'invention concerne en outre des molécules d'acide nucléique pouvant être utilisées lors de la mise en oeuvre dudit procédé.
Berghof Kornelia
Fandke Markus
Gasch Alexander
Biotecon Diagnostics Gmbh
Borden Ladner Gervais Llp
LandOfFree
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