C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/70 (2006.01)
Patent
CA 2500188
A method for measuring the replication capacity of HBV, e.g. HBV present in a biological sample, possibly in the presence of a pharmaceutical product, in particular an antiviral agent, the method comprising: (a) possibly extracting nucleic acids contained in the biological sample; (b) PCR amplifying HBV nucleic acids using at least two primer pairs selected so as to obtain at least two different amplified HBV genomic fragments which upon assembly represent a linear continuous DNA sequence transcriptable in pgRNA ; (c) cloning the fragments obtained under (b) into a vector under the control of an heterologous promoter, so producing a vector containing a linear continuous DNA sequence transcriptable in pgRNA under control of said promoter; (d) transfecting or transducing susceptible cells with the vector; (e) culturing the transfected or transduced cells in conditions allowing synthesis of HBV pgRNA from the cloned HBV DNA; (f) possibly treating the cultured cells with the pharmaceutical product, in particular antiviral agent; and (g) determining the replication capacity of the HBV, possibly incidence of the pharmaceutical product, preferably antiviral agent, on viral gene expression and/or viral replication.
L'invention concerne un procédé de mesure de la capacité de réplication du HBV, par exemple HBV présent dans un échantillon biologique, éventuellement en présence d'un produit pharmaceutique, notamment un agent antiviral. Ledit procédé consiste : (a) à éventuellement extraire des acides nucléiques contenus dans l'échantillon biologique ; (b) à amplifier par PCR les acides nucléiques du HBV au moyen d'au moins deux paires d'amorces choisies de manière à obtenir au moins deux fragments génomiques du HBV amplifiés qui, une fois montés, représentent une séquence d'ADN pouvant être transcrite en pgARN ; (c) à cloner les fragments obtenus en (b) en un vecteur sous le contrôle d'un promoteur hétérologue, ce qui produit un vecteur contenant une séquence d'ADN continue linéaire pouvant être transcrite en pgRNA sous le contrôle dudit promoteur ; (d) à transfecter ou transduire des cellules sensibles avec le vecteur ; (e) à cultiver les cellules transfectées ou transduites dans des conditions qui permettent la synthèse du HBV pgARN à partir du HBV ADN cloné ; (f) à éventuellement traiter les cellules cultivées avec le produit pharmaceutique, notamment un agent antiviral, et (g) à déterminer la capacité de réplication du HBV, éventuellement l'incidence du produit pharmaceutique, de préférence un agent antiviral, sur l'expression génique et/ou la réplication virale.
Durantel David
Durantel Sandra
Trepo Christian
Zoulim Fabien
Institut National de La Sante Et de La Recherche Medicale (inser
Robic
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1509201