C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/09 (2006.01)
Patent
CA 2747535
The present invention provides a method for the assembly of a polynucleic acid sequence from a plurality of nucleic acid sequences in which the polynucleic acid sequence is of a formula Nn+1, in which N represents a nucleic acid sequence and where n is 1 or greater than 1 and each N may be the same or a different nucleic acid sequence, in which the method comprises: (i) providing a first nucleic acid sequence N1 which has an oligonucleotide linker sequence L13 at the 3'-end of the nucleic acid sequence; (ii) providing a second nucleic acid sequence N2 which optionally has an oligonucleotide linker sequence L2 3' at the 3'- end of the nucleic acid sequence and which has an oligonucleotide linker sequence L2 5' at the 5 '-end of the nucleic acid sequence, wherein the 5' -end linker sequence L2 5' of nucleic acid sequence N2 is complementary to the 3'-end linker sequence L1 3' of nucleic acid sequence N1; (iii) optionally providing one or more additional nucleic acid sequences N, wherein nucleic acid sequence N2 has an oligonucleotide linker sequence L2 3' at the 3 '-end of the nucleic acid sequence, and wherein said one or more additional nucleic acid sequences N comprises a terminal additional nucleic acid sequence NZ, and wherein each additional nucleic acid sequence N has an oligonucleotide linker sequence at its 3'-end, wherein said terminal additional nucleic acid sequence NZ optionally lacks an oligonucleotide linker sequence at its 3'-end and wherein each additional nucleic acid sequence N has an oligonucleotide linker sequence at its 5'-end, wherein for the first additional nucleic acid sequence N3 the 5 '-end linker sequence L3 5' is complementary to the 3 '-end linker sequence L2 3' of nucleic acid sequence N2 and for each second and subsequent additional nucleic acid sequence N the 5 '-end linker sequence is complementary to the 3 '-end linker sequence of the respective preceding additional nucleic acid sequence; and (iv) ligating said nucleic acid sequences to form said polynucleic acid sequence.
La présente invention porte sur un procédé pour l'assemblage d'une séquence d'acide polynucléique à partir d'une pluralité de séquences d'acide nucléique, la séquence d'acide nucléique ayant pour formule Nn+1, dans laquelle N représente une séquence d'acide nucléique et dans laquelle n vaut 1 ou plus de 1 et les N peuvent être des séquences d'acide nucléique identiques ou différentes. Ce procédé comprend les opérations consistant à : (i) se procurer une première séquence d'acide nucléique N1 qui a une séquence de liaison oligonucléotidique L13 à l'extrémité 3' de la séquence d'acide nucléique ; (ii) se procurer une seconde séquence d'acide nucléique N2 qui a facultativement une séquence de liaison oligonucléotidique L23' à l'extrémité 3' de la séquence d'acide nucléique et qui a une séquence de liaison oligonucléotidique L25' à l'extrémité 5' de la séquence d'acide nucléique, la séquence de liaison à l'extrémité 5' L25' de la séquence d'acide nucléique N2 étant complémentaire à la séquence de liaison à l'extrémité 3' L13' de la séquence d'acide nucléique N1 ; (iii) facultativement se procurer une ou plusieurs séquences d'acide nucléique supplémentaires N, la séquence d'acide nucléique N2 ayant une séquence de liaison oligonucléotidique L23' à l'extrémité 3' de la séquence d'acide nucléique, et lesdites une ou plusieurs séquences d'acide nucléique supplémentaires N comprenant une séquence d'acide nucléique supplémentaire terminale NZ, et chaque séquence d'acide nucléique supplémentaire N ayant une séquence de liaison oligonucléotidique à son extrémité 3', une séquence de liaison oligonucléotidique faisant facultativement défaut à l'extrémité 3' de ladite séquence d'acide nucléique supplémentaire NZ, et chaque séquence d'acide nucléique supplémentaire N ayant une séquence de liaison oligonucléotidique à son extrémité 5', pour la première séquence d'acide nucléique supplémentaire N3, la séquence de liaison à l'extrémité 5' L35' étant complémentaire à la séquence de liaison à l'extrémité 3' L23' de la séquence d'acide nucléique N2, et pour chaque seconde séquence d'acide nucléique supplémentaire N et chaque séquence d'acide nucléique supplémentaire N suivante, la séquence de liaison à l'extrémité 5' étant complémentaire à la séquence de liaison à l'extrémité 3' de la séquence d'acide nucléique supplémentaire précédente respective ; et (iv) ligaturer lesdites séquences d'acide nucléique pour former ladite séquence d'acide polynucléique.
Canton Barry
Che Austin
Kelly Jason
Knight Tom
Shetty Reshma
Iti Scotland Limited
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1760075