C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 15/10 (2006.01) C40B 10/00 (2006.01)
Patent
CA 2617982
The invention relates to the production of variants of a protein in an in vitro evolution method, comprising the steps: (A) preparing an in vitro expression system, comprising: (i) a nucleic acid sequence S, which codes for a protein Y to be varied; (ii) a target molecule X1 capable of binding to protein Y and/or at least one variant Y thereof; (iii) an RNA polymerase (Pol) capable of transcribing the nucleic acid sequence S; (iv) a reverse transcriptase (RT) capable of reverse transcribing transcripts of nucleic acid sequence S, the target molecule X being coupled to Pol and protein Y to RT, or target molecule X being coupled to RT and protein Y being coupled to Pol; (B) incubating the in vitro expression system from (A) under conditions that enable a transcription, a reverse transcription and a translation while forming variants Y' of protein Y and nucleic acid sequences S' coding therefor, and which promote the formation of variants Y' with improved binding properties for target molecule X; (C) isolating and optionally characterizing those variants Y' that have improved binding properties for binding to X and/or isolation nucleic acid sequence variants S' that code for Y'.
L'invention concerne la production de variantes d'une protéine lors d'un procédé d'évolution in vitro comprenant les étapes suivantes: (A) mise à disposition d'un système d'expression in vitro comprenant (i) une séquence d'acides nucléiques S codant pour une protéine Y à faire varier, (ii) une molécule cible X capable de se lier à la protéine Y et/ou à au moins une variante Y' de cette protéine, (iii) une ARN polymérase (Pol) capable de transcrire la séquence d'acides nucléiques S, (iv) une transcriptase inverse (RT) servant à la transcription inverse de transcrits de la séquence d'acides nucléiques S, la molécule cible X étant couplée à Pol et la protéine Y à RT ou bien la molécule cible X étant couplée à RT et la protéine Y à Pol ; (B) incubation du système d'expression in vitro constitué de (A) dans des conditions qui permettent une transcription, une transcription inverse et une translation avec formation de variantes Y' de la protéine Y et de séquences d'acides nucléiques S' codant pour elles et qui favorisent la formation de variantes Y' à propriétés de liaison améliorées pour la molécule cible X ; (C) isolement et éventuellement caractérisation des variantes Y' présentant des propriétés de liaison améliorées pour la liaison à X et/ou isolement de variantes de séquences d'acides nucléiques S' codant pour Y'.
Geneart Ag
Norton Rose Or S.e.n.c.r.l. S.r.l./llp
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1686017