Method for concentrating mutant nucleic acid and nucleic...

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01)

Patent

CA 2231861

A method for concentrating a variant nucleic acid which comprises effecting once a cycle consisting of the steps (1 to 3) to be described below or repeating the cycle at least twice: (1) the step of the preparation of a sample nucleic acid by amplifying a specific region of the target nucleic acid; (2) the step of the competitive hybridization comprising adding to the sample nucleic acid at least an equimolar amount of a standard labeled nucleic acid prepared by introducing a labeling substance capable of binding to a solid-phase carrier into a nucleic acid having a base sequence complementary to the normal nucleic acid in the specific region of the target nucleic acid, followed by mixing; and (3) the step of the separation and removal of the hybridization product having the labeling substance capable of binding to a solid-phase carrier and the remaining standard labeled nucleic acid contained in the reaction mixture after the competitive hybridization by trapping in a solid-phase carrier.

Un procédé de concentration d'un acide nucléique variant consiste à éxecuter une fois un cycle comprenant les étapes (1 à 3) décrites ci-dessous, ou à répeter le cycle au moins deux fois: (1) l'étape de la préparation d'un échantillon d'acide nucléique par amplification d'une région spécifique de l'acide nucléique cible; (2) l'étape de l'hybridation compétitive consistant à ajouter à l'échantillon d'acide nucléique au moins une quantité équimolaire d'un acide nucléique étiquetté étalon préparé par introduction d'une substance d'étiquettage capable de se lier à un support en phase solide dans un acide nucléique présentant une séquence de base complémentaire d'un acide nucléique normal, dans la région spécifique de l'acide nucléique cible, puis mélange; et (3) l'étape de la separation et du retrait du produit d'hybridation présentant la substance étiquettante capable de se lier à un support en phase solide, et de l'acide nucléique étiquetté étalon restant contenu dans le mélange de réaction, après l'hybridation compétitive, par piégeage dans un support en phase solide.

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