Method for constructing recombinant adenovirus vector

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N

Patent

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C12N 15/861 (2006.01) C07K 14/54 (2006.01) C12N 5/10 (2006.01) A61K 48/00 (2006.01)

Patent

CA 2379860

A recombinant adenovirus vector comprising an adenovirus genome DNA and an expression cassette is produced by inserting and ligating a cosmid sequence having recombinase recognition sequences at both ends and the expression cassette into either deletion sites of the adenovirus genome DNA with the deletion of the E1 region or E1 and E3 regions to thereby construct a recombinant cosmid/adenovirus vector, cotransfecting this recombinant cosmid/adenovirus vector and a recombinase-expression vector into a cell line producing adenovirus E1 protein; and deleting the cosmid vector sequence from the recombinant cosmid/adenovirus vector in the cells. This method makes it possible to conveniently and efficiently construct a recombinant adenovirus vector.

Un vecteur d'adénovirus recombiné comprenant un ADN génomique d'adénovirus et une cassette d'expression est produit par insertion et liaison d'une séquence de cosmide dotée de séquences de reconnaissance de recombinase aux deux extrémités et de la cassette d'expression dans l'un des sites de délétion de l'ADN génomique adénoviral avec la délétion du domaine E1 ou des domaines E1 et E3 pour construire ainsi un vecteur d'adénovirus à cosmide recombiné; cotransfection de ce vecteur d'adénovirus recombiné et d'un vecteur d'expression de recombinase dans une cellule produisant une protéine E1 d'adénovirus; et par élimination de la séquence du vecteur à cosmide du vecteur d'adénovirus à cosmide recombiné, dans la cellule. Ce procédé permet de construire de manière pratique et efficace un vecteur d'adénovirus recombiné.

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