Method for creating polynucleotide molecules

Details Method for creating polynucleotide molecules Method for creating polynucleotide molecules

C - Chemistry, Metallurgy

12

N

C12N 15/10 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)

Patent

CA 2485218

The invention relates to methods for creating polynucleotide molecules with modified characteristics, said methods running through a cycle comprising the following steps:(a) provision of a double-stranded polynucleotide molecule or a population of double-stranded polynucleotide molecules, the individual polynucleotides of said population having at least one homologous sequence part and at least one heterologous sequence part,(b) creation of single-strand breaks in the double-stranded polynucleotide molecules, (c) nucleolytic degradation in the 5'.fwdarw. 3' direction starting from the single-strand breaks with simultaneous new synthesis in the 5' .fwdarw. 3' direction and shifting of the single-strand breaks in the direction of the 3' end, (d) production of single-stranded polynucleotide molecules, (e) production of partially double-stranded polynucleotide molecules of the single-stranded polynucleotide molecules provided in step (d), (f) template-directed nucleic acid synthesis starting from the partially double-stranded polynucleotide molecules produced in step (e), whereby steps (b) and (c) can be carried out in succession or simultaneously.

L'invention concerne des procédés de production de molécules de type polynucléotides qui présentent des propriétés modifiées. Ces procédés comprennent au moins un cycle ininterrompu comportant les étapes suivantes : (a) préparation d'une molécule polynucléotide bicaténaire ou d'une population de molécules polynucléotides bicaténaires, les polynucléotides individuels de cette population comprenant au moins un segment de séquence homologue et au moins un segment de séquence hétérologue ; (b) formation de cassures monocaténaires dans les molécules polynucléotides bicaténaires ; (c) dégradation nucléotidique dans la direction 5'.fwdarw.3' à partir des cassures monocaténaires ainsi que synthèse simultanée de nouveaux nucléotides dans la direction 5'.fwdarw.3' et déplacement des cassures monocaténaires en direction de l'extrémité 3' ; (d) production de molécules polynucléotides monocaténaires ; (e) production de molécules polynucléotides partiellement bicaténaires à partir des molécules polynucléotides monocaténaires préparées au cours de l'étape (d) ; et (f) synthèse d'acide nucléique assistée par matrice, à partir des molécules polynucléotides partiellement bicaténaires produites au cours de l'étape (e). Selon l'invention, les étapes (b) et (c) peuvent être exécutées successivement ou simultanément.

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