C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2440698
A method for determining the extent of a processive nucleic acid polymerase reaction producing pyrophosphate can be conducted, in the presence of all components necessary for the progression of nucleic acid synthesis, wherein the components comprise a substrate for the nucleic acid polymerase which is either dATP or a dATP analogue. The method includes a pyrophosphate assay comprising the steps of conversion of the pyrophosphate to ATP and detection of light produced by the bioluminescence reaction of a luciferase with ATP, wherein one or both of the following apply: a) the luciferase reacts with ATP and the substrate, such that the spectral overlap is reduced relative to the spectral overlap between the outputs of reaction between wild-type Photinus pyralis luciferase with ATP and dATP respectively; and b) the luciferase reacts with the substrate to give a reduced bioluminescence relative to that produced by the reaction of wild-type Photinus pyralis luciferase with dATP.
L'invention concerne un procédé pour déterminer l'étendue d'une réaction de polymérase processive d'acide nucléique, laquelle réaction produit du pyrophosphate, en présence de tous les composantes nécessaires à la progression de la synthèse d'acide nucléique, ces composantes comprenant un substrat pour la polymérase d'acide nucléique qui est soit un dATP soit un analogue de dATP. Ce procédé comprend une analyse du pyrophosphate qui comprend les étapes consistant à convertir le pyrophosphate en ATP et à détecter la lumière produite par la réaction de bioluminescence d'une luciférase avec ATP, les conséquences pouvant être l'une ou l'autre, ou les deux, des suivantes: a) la luciférase réagit avec ATP et le substrat, de manière que le recouvrement spectral soit réduit par rapport au recouvrement spectral entre les résultats de la réaction entre la luciférase Photinus pyralis de type sauvage et ATP, et dATP respectivement, et b) la luciférase réagit avec le substrat pour produire une bioluminescence réduite par rapport à celle produite par la réaction de la luciférase Photinus pyralis de type sauvage avec dATP.
Murray James Augustus Henry
Tisi Laurence Carlo
Bereskin & Parr Llp/s.e.n.c.r.l.,s.r.l.
Cambridge University Technical Services Limited
LandOfFree
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