G - Physics – 01 – N
Patent
G - Physics
01
N
G01N 33/72 (2006.01)
Patent
CA 2188920
The present invention relates to methods for the diagnosis and monitoring of diseases and disorders associate with advanced glycosylation endproducts (AGE) formation, such as diabetes and the ageing process. In particular, the invention is directed to detecting AGE-modified hemoglobin (Hb-AGE) for the foregoing purposes, and in improved assay therefore. The method involves diluting the sample in a dilution buffer, which dilution buffer comprises an anionic protein denaturing detergent at a concentration sufficient to denature hemoglobin-AGE without interfering in binding of reagents with hemoglobin-AGE the dilution buffer may also include a non-ionic surfactant at a concentration sufficient to facilitate detection of hemoglobin-AGE; and a denaturing agent at a concentration sufficient to denature hemoglobin-AGE and increase assay sensitivity, without denaturing binding of reagents to hemoglobin-AGE. After diluting the sample in the dilution buffer, the sample is contacted with means for detecting the presence of hemoglobin-AGE in the sample, and the presence of hemoglobin-AGE in the sample is detected with the detection means. Dilution buffers and kits for practicing the invention are also provided. In specific examples, the level of AGE in hemoglobin in samples from human and rat normal subjects and diabetic subjects is detected. The results obtained from human samples show a high degree of correlation between the level of hemoglobin-AGE in a sample and the level of hemoglobin-A1c in a sample. Most importantly, the invention is used to detect the "aminoguanidine effect", which is the decrease in the level of hemoglobin-AGE in a sample from a subject undergoing therapy with the AGE-inhibitor aminoguanidine.
La présente invention concerne des procédés permettant de diagnostiquer et de surveiller des maladies et des troubles associés à la formation de produits finaux de glycolysation avancée, comme le diabète et le processus de vieillissement. En particulier, l'invention concerne la détection de l'hémoglobine modifiée par les produits finaux de glycolysation avancée, et un dosage améliorée de celle-ci. Le procédé consiste à diluer l'échantillon dans un tampon de dilution, lequel tampon de dilution comprend un détergent dénaturant la protéine anionique à une concentration suffisante pour dénaturer les produits finaux de glycolysation avancée dans l'hémoglobine, sans interférer dans la liaison des réactifs aux produits finaux de glycolysation avancée dans l'hémoglobine. Le tampon de dilution peut également comprendre un agent de surface non ionique à une concentration suffisante pour faciliter la détection des produits finaux de glycolysation avancée dans l'hémoglobine; et un agent dénaturant à une concentration suffisante pour dénaturer les produits finaux de glycolysation avancée dans l'hémoglobine et augmenter la sensibilité du dosage, sans dénaturer la liaison des réactifs aux produits finaux de glycolysation avancée dans l'hémoglobine. Après avoir dilué l'échantillon dans le tampon de dilution, l'échantillon est placé en contact avec des moyens pour détecter la présence de produits finaux de glycolysation avancée dans l'hémoglobine dans l'échantillon, et la présence de produits finaux de glycolysation avancée dans l'hémoglobine dans l'échantillon est détectée par des moyens de détection. Des tampons de dilution et des matériels permettant de mettre en application l'invention sont également prévus. Dans des exemples spécifiques, le niveau de produits finaux de glycolysation avancée dans l'hémoglobine dans des échantillons de sujets humains normaux et de rats normaux et de sujets diabétiques est détecté. Les résultats obtenus sur les échantillons humains mettent en évidence un degré de corrélation élevée entre le niveau de produits finaux de glycolysation avancée dans l'hémoglobine dans un échantillon et le niveau d'hémoglobine A¿1c? dans un échantillon. L'invention est également utilisée pour détecter "l'effet d'aminoguanidine", qui se traduit par la diminution du niveau de produits finaux de glycolysation avancée dans l'hémoglobine dans un échantillon prélevé sur un sujet traité par de l'aminoguanidine inhibitrice des produits finaux de glycolysation avancée dans l'hémoglobine.
Bucala Richard J.
Cerami Anthony
Founds Henry W.
Yamin Michael A.
Alteon Inc.
Ogilvy Renault Llp/s.e.n.c.r.l.,s.r.l.
LandOfFree
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