C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01)
Patent
CA 2491563
Methods are provided for detecting a mutant polynucleotide in mixture of mutant polynucleotides, wild-type polynucleotides and unrelated polynucleotides. The method uses an extension primer complementary to a first target sequence in both the wild-type and mutant polynucleotides. The method also uses a probe complementary to a second target sequence in the wild-type polynucleotides but not in the mutant polynucleotides. Extension of the primers annealed to the first target sequence in mutant polynucleotides produces long extension products. Extention of the primers annealed to the first target sequence in wild-type polynucleotides is blocked by the probe annealed to the second target sequence. Short extension products or no extension products are produced. The extension products are isolated and used in a polymerase chain reaction (PCR). The PCR preferentially amplifies long extension products.
Cette invention a trait à des méthodes de détection d'un polynucléotide mutant dans un mélange composé de polynucléotides mutants, de polynucléotides du type sauvage et de polynucléotides sans rapport. La méthode utilise une amorce d'extension complémentaire d'une première séquence cible chez les polynucléotides du type sauvage et mutants. Elle utilise également une sonde complémentaire d'une seconde séquence cible, mais uniquement avec les polynucléotides du type sauvage. L'extension des amorces fusionnées avec la première séquence cible chez les polynucléotides mutants permet d'obtenir des produits longue extension. L'extension des amorces fusionnées avec la première séquence cible chez les polynucléotides du type sauvage est bloquée par la sonde fusionnée avec la seconde séquence cible. Des produits longue extension ou sans extension sont obtenus. On isole ces produits à extension et on les utilise dans une réaction en chaîne de la polymérase (PCR). La PCR amplifie préférentiellement les produits longue extension.
Cleveland State University
Norton Rose Or S.e.n.c.r.l. S.r.l./llp
LandOfFree
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