C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01)
Patent
CA 2240018
A method for conveniently detecting nonsense mutations and frameshift mutations, which is applicable even to large-sized test DNAs. This method comprises inserting, into a vector containing a promoter, an initiation codon located downstream the promoter and a reporter gene located downstream the initiation codon which is a structural gene under the regulation by the promoter and a fused polypeptide consisting of the polypeptide encoded by which and another polypeptide bonded to the N-terminus of the former polypeptide can be detected based on the function of the polypeptide encoded by the structural gene, a test nucleic acid fragment which makes the reading frame of the reporter gene to match the above-mentioned initiation codon when it is a normal type one to a site downstream the initiation codon but upstream the reporter gene; expressing the test nucleic acid fragment in the recombinant vector thus obtained and the reporter gene downstream the same in host cells; and thus examining whether or not a fused polypeptide having the function of the polypeptide encoded by the reporter gene is produced.
Ce procédé, qui permet la détection pratique de mutations non-sens et de mutations déphasantes et qui est applicable même à des ADN de test de grande taille, consiste à introduire, dans un vecteur contenant un promoteur, un codon d'initiation situé en aval du promoteur et un gène marqueur situé en aval du codon d'initiation qui est un gène structurel sous la régulation du promoteur et d'un polypeptide condensé constitué par le polypeptide codé par ce gène et par un autre polypeptide lié au résidu N-terminal du premier polypeptide, pouvant être détecté sur la base de la fonction du polypeptide codé par le gène structurel, un fragment d'acide nucléique de test qui amène le cadre de lecture du gène marqueur à faire correspondre le codon d'initiation mentionné ci-dessus, lorsque celui-ci est de type normal, avec un site en aval du codon d'initiation mais en amont du gène marqueur; à exprimer le fragment d'acide nucléique de test dans le vecteur recombinant ainsi obtenu et le gène marqueur en aval de celui-ci dans des cellules hôtes; et à examiner alors s'il y a production d'un polypeptide condensé ayant la fonction du polypeptide codé par le gène marqueur.
Ishioka Chikashi
Kanamaru Ryunosuke
Suzuki Takao
Smart & Biggar
Srl Inc.
LandOfFree
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