C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/14 (2006.01) C12M 1/00 (2006.01) C12M 1/34 (2006.01) C12Q 1/04 (2006.01) C12N 1/20 (2006.01)
Patent
CA 2180540
The present invention exploits the herein first reported, empirical observation that even though staphylococci produce the enzyme, .beta.-glucosidase, this genus of bacteria is not able to produce a metabolite that will enzymatically react with 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-.beta.-D- glucopyranoside, a substrate commonly used to detect the presence of .beta.-glucosidase produced by other bacteria. In view of this unexpected observation, one embodiment of the present invention includes a selective medium containing inhibitors to enhance staphylococci growth as well as a first glucopyranoside substrate. such as 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-.beta.-D-glucopyranoside, and a second phosphatase substrate, such as 6-chloro-3-indolylphosphate or 5-bromo-6-chloro-3-indolylphosphate. In this embodiment, staphylococci in a sample will produce metabolites that will react with the phosphate substrate in the medium to produce colonies having red to red-violet color while other bacteria in the sample will produce .beta.-glucosidase that will react with the glucopyranosidase substrate in the medium and produce colonies having a blue color. In a particularly preferred embodiment of this invention, a thin film culture plate device, such as a PETRIFILM culture plate device, is prepared using a dry culture medium containing selected inhibitors, a first glucopyranoside substrate and a second phosphate substrate. When the thin film culture plate device is inoculated with a sample and then incubated for a sufficient period of time, staphylococci in the sample will produce colonies on the thin film device having a red color and other bacteria in the sample will produce colonies on the device having a blue color.
Cette invention tire profit de l'observation empirique, rapportée pour la première fois ici, et selon laquelle, bien que les staphylocoques produisent l'enzyme .beta.-gluosidase, ce genre de bactéries n'est pas capable de produire un métabolite qui va réagir par voie enzymatique avec 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-.beta.-D-glucopyranoside, un substrat communément utilisé pour détecter la présence de .beta.-glucosidase produite par d'autres bactéries. A la lumière de cette observation inattendue, la présente invention prévoit d'utiliser, dans l'un de ses modes de réalisation, un milieu sélectif contenant des inhibiteurs destinés à favoriser la croissance des staphylocoques, ainsi qu'un premier substrat de glucopyranoside, tel que 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-.beta.-D-glucopyranoside, et un second substrat de phosphatase, tel que 6-chloro-3-indolylphosphate ou 5-bromo-6-chloro-3-indolylphosphate. Dans ce mode de réalisation, les staphylocoques contenus dans un échantillon vont produire des métabolites qui réagissent avec le substrat de phosphate dans le milieu en question, afin de produire des colonies ayant une couleur allant de rouge à rouge-violet, tandis que d'autres bactéries de l'échantillon vont produire de la .beta.-glucosidase, laquelle va réagir avec le substrat de glucopyranosidase dans le milieu en question et produire des colonies ayant une couleur bleue. Dans un mode de réalisation particulièment préféré de cette invention, un dispositif à plaque de culture à mince film, tel qu'un dispositif à plaque de culture PETRIFILM, est préparé au moyen d'un milieu de culture sec contenant des inhibiteurs sélectionnés, un premier substrat de glucopyranoside et un second substrat de phosphate. Lorsqu'on inocule un échantillon de bactéries dans ce dispositif à plaque de culture à mince film et qu'on laisse incuber ensuite ledit dispositif pendant une période suffisante, les staphylocoques contenus dans l'échantillon vont produire sur le dispositif à film mince des colonies ayant une couleur rouge et d'autres bactéries contenues dans l'échantillon vont produire sur ledit dispositif des colonies ayant une couleur bleue.
Minnesota Mining And Manufacturing Company
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1987389