G - Physics – 01 – N
Patent
G - Physics
01
N
G01N 33/543 (2006.01) G01N 33/53 (2006.01) C12N 15/09 (2006.01)
Patent
CA 2753873
Disclosed is a method for detecting a substance in a biological sample. Also disclosed is a carrier for use in the method. Further disclosed is a kit. An embodiment of the method comprises the following steps 1) to 4): 1) providing a carrier having biotin bound thereto, and a fusion protein of a protein capable of specifically binding to a substance to be detected and a biotin-binding protein; 2) binding the fusion protein to the carrier mentioned in step 1) to produce the carrier having the fusion protein bound thereto; 3) adding a material (a) shown below and any one of materials (b-i) and (b-ii) shown below to the carrier having the fusion protein bound thereto produced in step 2) and mixing together; and 4) detecting the substance to be detected which is bound to the protein capable of specifically binding to the substance to be detected in the fusion protein: (a) the biological sample; (b-i) a cell disruption extract prepared from a cell which is homogeneous to a host cell utilized for expressing the fusion protein mentioned in step 1), and a biotin-binding protein; and (b-ii) a cell disruption extract prepared from a cell which is homogeneous to a host cell utilized for expressing the fusion protein mentioned in step 1) and in which a biotin-binding protein is expressed by a genetically engineering technology.
La présente invention a pour objet un procédé de détection d'une substance dans un échantillon biologique. La présente invention concerne également un support destiné à être utilisé dans le procédé. La présente invention a en outre pour objet un kit. Un mode de réalisation du procédé comprend les étapes 1) à 4) suivantes consistant à : 1) prévoir un support auquel une biotine est liée, et une protéine de fusion d'une protéine capable de se lier spécifiquement à une substance à détecter et d'une protéine de liaison à la biotine ; 2) à lier la protéine de fusion au support mentionné dans l'étape 1) pour produire le support auquel la protéine de fusion est liée ; 3) à ajouter une matière (a) présentée ci-dessous et l'une quelconque des matières (b-i) et (b-ii) présentées ci-dessous au support auquel la protéine de fusion est liée produit dans l'étape 2) et à les mélanger ensemble ; et 4) à détecter la substance à détecter qui est liée à la protéine capable de se lier spécifiquement à la substance à détecter dans la protéine de fusion : (a) l'échantillon biologique ; (b-i) un extrait de rupture de cellule préparé à partir d'une cellule qui est homogène par rapport à une cellule hôte utilisée pour exprimer la protéine de fusion mentionnée dans l'étape 1), et une protéine de liaison à la biotine ; et (b-ii) un extrait de rupture de cellule préparé à partir d'une cellule qui est homogène par rapport à une cellule hôte utilisée pour exprimer la protéine de fusion mentionnée dans l'étape 1) et dans laquelle une protéine de liaison à la biotine est exprimée par une technologie de modification génétique.
Kondo Kazuhiro
Oka Naomi
Takakura Yoshimitsu
Japan Tobacco Inc.
Robic
Virus Ikagaku Kenkyusho Inc.
LandOfFree
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