C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2318760
A method for determining the base sequence of a target DNA fragment which comprises amplifying the DNA fragment while forming a nucleic acid transcript by using an RNA polymerase with the use of the thus amplified DNA fragment as a template in the presence of a nucleic acid transcript terminator, and then analyzing the nucleic acid transcript thus obtained, wherein the amplification of the target DNA fragment and the formation of the transcript are effected isothermally. The amplification of the target DNA fragment and the formation of the transcript are effected at around ordinary temperature and the target DNA fragment can be amplified by the strand replacement/amplification method. According to this novel method, a DNA can be sequenced by effecting the amplification of the target DNA fragment and the formation of the nucleic acid transcript at the same time without resort to any thermostable RNA polymerase.
Cette invention concerne un procédé permettant de déterminer la séquence de base d'un fragment d'ADN voulu. Ce procédé consiste à amplifier le fragment d'ADN tout en formant un transcript d'acide nucléique à l'aide d'une ARN polymérase et en utilisant le fragment d'ADN ainsi amplifié comme modèle en présence d'un terminateur de transcript d'acide nucléique. On analyse ensuite le transcript d'acide nucléique ainsi obtenu. L'amplification du fragment d'ADN voulu et la formation du transcript se font dans des conditions isothermes. L'amplification du fragment d'ADN voulu et la formation du transcript se déroulent à une température ordinaire, le fragment d'ADN voulu pouvant être amplifié selon le procédé de remplacement/amplification de brins. Ce nouveau procédé permet de séquencer un ADN en effectuant l'amplification du fragment d'ADN voulu et en formant le transcript d'acide nucléique au même moment, ceci sans qu'il soit nécessaire de recourir à une quelconque ARN polymérase stable sur le plan thermique.
Dennison Associates
Hayashizaki Yoshihide
Riken
The Institute Of Physical And Chemical Research
LandOfFree
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