C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12M 1/34 (2006.01) C12M 1/38 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) C40B 30/04 (2006.01)
Patent
CA 2739886
The invention refers to molecular biology, medicine, biotechnology and is related to performance of Polymerase Chain Reaction and device for its implementation with real-time registration of reaction-product build-up. The task of the invention is solved as a result of using the method and device for its implementation for identification of nucleic acids by a real-time polymerase chain reaction including introduction of liquid samples containing nucleic acid into the reaction zones on the upper surface of the heat-conducting substrate of the microchip; isolation of the introduced samples from the atmosphere; contact of the nucleic acid of the sample with components of the polymerase chain reaction during thermocycling of the samples with heat removal through the outer surface of the microchip; fluorescent detection of the change of the quantity of the polymerase chain reaction products during thermocycling; identification of the quantity of the initial nucleic acid in the samples by the dynamic of growth of the fluorescent signal wherein the microchip used contains a heat- conducting substrate from a heat-conducting material with the thermal conductivity coefficient of more than 1 W/cm.cndot.K and the thermal diffusivity coefficient of more than 0.6 cm2/s while the reaction zones on the microchip surface are separated from the heat-conducting substrate by a layer of the passivating material covalently bound to the surface of the heat-conducting substrate, and the introduced samples are isolated by separating them from the atmosphere by a layer of liquid immiscible with water that is retained on the upper surface of the heat-conducting substrate by means of a peripheral barrier, with the ratio of the aggregate thermal mass of the microchip with the introduced samples and the layer of the liquid immiscible with water to thermal conductance of the microchip substrate not exceeding 0.04 s. The technical result is reduced duration of the analysis, higher reliability, accuracy, efficiency and cost-effectiveness of the analysis.
La présente invention concerne la biologie moléculaire, la médecine et la biotechnologie et notamment un procédé de réaction de polymérase en chaîne et un dispositif pour la mise en uvre de celle-ci avec l'enregistrement en temps réel de l'accumulation des produits de réaction. Selon l'invention, on utilise un procédé et un dispositif pour la détermination des acides nucléiques au moyen de la réaction de polymérase en chaîne en temps réel qui consiste à introduire des échantillons de liquide contenant des acides nucléiques dans des zones de réaction à la surface supérieure d'un substrat thermiquement conducteur dune puce; isoler ces échantillons de l'atmosphère; faire réagir l'acide nucléique de léchantillon avec des composants de la réaction de polymérase en chaîne pendant le thermocyclage des échantillons et lévacuation de la chaleur via la surface externe de la puce; déterminer par fluorescence tout changement de quantité des produits de la réaction de polymérase en chaîne lors du thermocyclage; et déterminer la quantité d'acide nucléique initial dans les échantillons en fonction de la dynamique de la croissance du signal de fluorescence. Le procédé est caractérisé en ce que la puce électronique utilisée a une conductivité thermique du substrat en un matériau conducteur de chaleur possédant un coefficient de conductivité thermique supérieure à 1 W / cm K et un coefficient de diffusion thermique supérieur à 0,6 cm (2) / s, les zones de réaction à la surface de puce étant séparées du substrat conducteur de chaleur par une couche de matériau de passivation qui est lié par covalence à la surface du matériau conducteur de chaleur, les échantillons introduits étant isolés de l'atmosphère par une couche de liquide non miscible à l'eau qui est retenue à la surface supérieure du substrat conducteur de chaleur à l'aide d'une barrière périphérique. La relation entre la masse thermique totale de la puce et des échantillons et la couche de liquide non miscible à l'eau et la conductivité thermique du substrat de la puce est égale ou inférieure à 0,04 s. Linvention permet de réduire le temps d'analyse et d'accroître la fiabilité, la fidélité, l'efficacité et le rendement de l'analyse.
Slyadnev Maxim Nikolaevich
Stroganov Alexander Anatolevich
Dimock Stratton Llp
Slyadnev Maxim Nikolaevich
Stroganov Alexander Anatolevich
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1825004