Method for differentially detecting multimeric form from...

G - Physics – 01 – N

Patent

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G01N 33/549 (2006.01) G01N 33/546 (2006.01) G01N 33/553 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01) G01N 33/58 (2006.01)

Patent

CA 2649359

The present invention relates to a method for differentially detecting a multimeric form from a monomeric form of a multimer-forming polypeptide in a biosample, which comprises the steps of: (a) preparing a carrier-capturing antibody conjugate by binding a capturing antibody to the surface of a solid phase carrier in a three dimensional manner, wherein the capturing antibody is capable of recognizing an epitope on the multimer-forming polypeptide; (b) preparing a detection antibody, wherein an epitope recognized by the detection antibody is present at a position in the multimer-forming polypeptide to cause a steric hindrance by the capturing antibody bound to its epitope to prevent the binding of the detection antibody to the multimer-forming polypeptide; (c) contacting simultaneously the carrier-capturing antibody conjugate and the detection antibody to the biosample; and (d) detecting the formation of a carrier-capturing antibody-multimeric form-detection antibody complex.

L'invention concerne un procédé de détection différentielle d'une forme multimère et d'une forme monomère dans un polypeptide formant des multimères, dans un échantillon biologique. Ce procédé consiste: (a) à préparer un conjugué support-anticorps de capture par fixation d'un anticorps de capture à la surface d'un support en phase solide de manière tridimensionnelle, l'anticorps de capture étant capable de reconnaître un épitope sur le polypeptide formant des monomères; (b) à préparer un anticorps de détection, un épitope reconnu par l'anticorps de détection étant présent sur le polypeptide formant des multimères dans une position donnée pour entraîner un empêchement stérique par la fixation de l'anticorps de capture à son épitope et empêcher ainsi la fixation de l'anticorps de détection au polypeptide formant des multimères; (c) à mettre simultanément en contact le conjugué support-anticorps de capture et l'anticorps de détection avec l'échantillon biologique; et enfin (d) à détecter la formation d'un complexe support-anticorps de capture-anticorps de détection de forme multimère.

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