Method for electrophoretically separating membrane proteins

C - Chemistry – Metallurgy – 07 – K

Patent

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C07K 1/26 (2006.01) C07K 14/705 (2006.01)

Patent

CA 2411684

The one and two-dimensional separation of proteins extending through the membrane (membrane proteins) is a prerequisite for a complete analysis of the proteome of a functionally intact cell organelle. A substantial drawback of prior art methods for separating is that their applicability is limited to peripheral water-soluble proteins. The aim of the novel method is to electrophoretically separate membrane proteins in one or two dimensions. To this end, membranes from cell organelles, whose membrane protein stock should be separated, are placed on planar supports whose surface was modified using suitable methods in such a manner that the membrane proteins maintain their ability to laterally diffuse in the membrane plane after being placed on the support. By subsequently applying electrical fields, the proteins can be electrophoretically displaced in the membrane plane and, as a result, can be separated in one or two dimensions according to their different charge characteristics.

La séparation unidimensionnelle ou bidimensionnelle de protéines contenues dans la membrane (protéines membranaires) est une condition préalable pour une analyse complète du protéome d'une organelle cellulaire fonctionnellement intacte. L'inconvénient majeur des méthodes connues de séparation est que leur applicabilité est limitée aux protéines périphériques hydrosolubles. L'objet de ce nouveau procédé est la séparation électrophorétique de protéines membranaires dans une ou deux dimensions. A cet effet, les membranes d'organelles cellulaires dont la charge en protéines membranaires doit être séparée sont déposées sur des supports plans dont la surface a été modifiée selon des méthodes appropriées de manière telle que les protéines membranaires conservent leur capacité de diffusion latérale dans le plan de la membrane après dépôt sur le support. L'application immédiatement après de champs électriques permet le déplacement des protéines de manière électrophorétique dans le plan de la membrane et donc la séparation desdites protéines en une ou deux dimensions en fonction de leurs caractéristiques différentes de charge.

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