C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12Q 1/70 (2006.01)
Patent
CA 2139070
This invention relates to a new and novel method for significantly enhancing the sensitivity of assays aimed at detecting the presence of target deoxyribonucleic acid (DNA) or ribonucleic acid (RNA) sequences in a sample. Specifically, this method applies to techniques that employ polymerase chain reactions (PCR®) or other nucleic amplificatio techniques to amplify copies of the target DNA or RNA (via reverse- transcriptase followed by PCR, Murakawa et al. 1988 DNA 7-287) to allow for detection. The method of the present invention combines the following four steps for the first time: DNA amplicon synthesis and amplification in a modified PCR using a target nucleic acid sequence as a template; amplicon transcription into RNA and amplification ; RNA:DNA hybrid formation; and immunochemical detection of heteroduplex nucleic acid sequences. This method extends the standard PCR techniques to accommodate amplification of copies of the PCR product and transcription into RNA, which, following binding to DNA sequences facilitates immunochemical detection of the RNA:DNA hybrids thereby formed. This combination of steps results in a new assay with increased simplicity, speed and sensitivity, including a greatly improved signal-to-noise ratio, over standard nucleic acid detection methods. This improved method will be extremely useful for performing analyses in the forensic, clinical, agricultural and biological fields.
La présente invention concerne une nouvelle méthode pour améliorer considérablement la sensibilité d'essais destinés à détecter la présence de séquences cibles d'acide désoxyribonucléique (ADN) ou d'acide ribonucléique (ARN) dans un échantillon. Plus précisément, la méthode s'applique à des techniques qui emploient des réactions en chaîne de la polymérase (PCR®) ou d'autres techniques d'amplification nucléique pour amplifier les copies de l'ADN ou de l'ARN cible (au moyen d'une transcriptase inverse suivie de PCR, Murakawa et al. 1988 DNA 7-287) pour permettre une détection. La méthode prévue dans la présente invention combine, pour la première fois, les quatre étapes suivantes : synthèse de l'amplicon d'ADN et amplification dans une PCR modifiée en utilisant une séquence cible d'acide nucléique comme modèle; transcription d'amplicon dans l'ARN et amplification; formation d'un hybride ARN:ADN; et détection immunochimique de séquences d'acide nucléique hétéroduplex. La méthode prolonge les techniques conventionnelles de PCR pour assurer l'amplification de copies du produit de PCR et la transcription dans l'ARN, ce qui, après une liaison avec les séquences d'ADN, facilite la détection immunochimique des hybrides ARN:ADN ainsi formés. Cette combinaison d'étapes donne lieu à un nouvel essai d'une simplicité, d'une rapidité et d'une sensibilité accrues, sans oublier un rapport signal-bruit nettement amélioré, par rapport aux méthodes conventionnelles de détection d'acide nucléique. La méthode améliorée sera extrêmement utile pour effectuer des analyses dans les domaines judiciaire, clinique, agricole et biologique.
567782 B.c.ltd.
Blais Burton W.
Mbm Intellectual Property Law Llp
LandOfFree
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