C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) G01N 33/543 (2006.01)
Patent
CA 2511829
The present invention is directed to a novel method of efficiently hybridising probes onto immobilized genomic DNA and/or RNA comprising the steps of (a) providing intact genomic DNA and denaturing said intact genomic DNA; (b) immobilizing said denatured intact genomic DNA onto a matrix; said matrix comprising pore sizes within a range of 0.6 ~m to 2 ~m including the outer limits (c) providing a set of probes and passing said probes through said matrix under conditions favouring hybridisation of the probes to its complementary sequence in said intact genomic DNA; and (d) washing off non- hybridised probes through said matrix, leaving formed hybridised intact genomic DNA/probe complexes for further analysis.The present invention is further directed to a novel method for target nucleic acid detection and quantification in a genomic DNA sample comprising the steps of: (a) providing intact genomic DNA and denaturing said intact genomic DNA; (b) performing a hybridisation according to a method as described above; (c) recovering hybridised probes; and essentially simultaneously amplifying any recovered probe using a single primer pair, each member of said primer pair binding to each recovered probe onto the respective flanking primer attachment sequences of said probe, and (d) qualitatively and quantitatively analysing the recovered amplified probes of step (c).The present invention also relates to the uses thereof as well as devices, apparatus and kits for performing said methods of the invention.
La présente invention concerne un nouveau procédé d'hybridation efficace de sondes sur ADN et/ou ARN génomique immobilisé, lequel procédé consiste (a) à fournir l'ADN génomique intact et à dénaturer cet ADN génomique intact, (b) à immobiliser cet ADN génomique intact dénaturé sur une matrice, ladite matrice présentant des tailles de pores comprises entre 0,6 ?m et 2 ?m (limites extérieures incluses), (c) à fournir un ensemble de sondes et à passer ces sondes à travers ladite matrice dans des conditions favorisant l'hybridation desdites sondes à sa séquence complémentaire dans ledit ADN génomique intact et (d) à séparer les sondes non hybridées à travers ladite matrice, en laissant les complexes sondes/ADN génomique intact hybridés pour une analyse ultérieure. La présente invention concerne également un nouveau procédé de détection et de quantification d'acides nucléiques cibles dans un échantillon d'ADN génomique, lequel procédé consiste (a) à fournir l'ADN génomique intact et à dénaturer cet ADN génomique intact, (b) à effectuer une hybridation selon le procédé décrit ci-dessus, (c) à récupérer des sondes hybridées et à amplifier de façon sensiblement simultanée toute sonde récupérée à l'aide d'une paire d'amorces simple, chaque membre de cette paire d'amorces se liant à chaque sonde récupérée sur les séquences d'attache d'amorces flanquantes respectives de ladite sonde, et (d) à analyser qualitativement et quantitativement les sondes récupérées amplifiées à l'étape (c). Ladite invention se rapporte également aux utilisations de ces dernières ainsi qu'à des dispositifs, appareils et trousses permettant la mise en oeuvre desdits procédés.
Chan Alan
Van Beuningen Marinus Gerardus Johannes
Wu Ying
Borden Ladner Gervais Llp
Pamgene Bv
LandOfFree
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