C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2227611
A ligase-based assay which relies only upon knowledge of the wild-type sequence of a gene or gene fragment is used to detect all types of mutations, i.e., point mutations, insertions and deletions. The assay makes use of a set of oligonucleotide probes, which may be packaged in kit form, which hybridize in series along the length of the gene. The ligation of the probes together form a ligation product, the size of which is evaluated. When the gene or gene fragment being analyzed corresponds to the normal sequence and thus perfectly matches the probes, all of the probes in the set are ligated together, and the ligation product has a certain resulting size. When a mutation appears in the gene, the hybridization of the probe overlapping the mutation is impaired, with the result that some or all of the ligation product is of smaller size. By evaluating the size of the ligation product, both the existence of a mutation and its approximate position can be identified.
On fait appel à un dosage, à base de ligase, qui ne repose que sur la connaissance de la séquence de type sauvage d'un gène ou d'un fragment de gène, pour détecter toutes les types de mutations, c'est-à-dire, des mutations ponctuelles, des insertions et des délétions. Le dosage fait intervenir un jeu de sondes oligonucléotidiques, pouvant se présenter sous la forme d'un kit, qui s'hybrident en série sur la longueur du gène. La ligature des sondes les unes avec les autres permet de former un produit de ligature dont la taille est évaluée. Lorsque le gène ou le fragment de gène en cours d'analyse, correspond à la séquence normale et, de la sorte, est en parfaite concordance avec les sondes, toutes les sondes faisant partie du jeu sont ligaturées et le produit de ligature a une certaine taille résultante. Lorsque survient une mutation dans le gène, l'hybridation de la sonde chevauchant la mutation est altérée, ce qui se solde par une taille réduite de certains produits de ligature sinon de tous. Il est possible, grâce à l'évaluation de la taille du produit de ligature, de déterminer à la fois l'existence d'une mutation et sa position approximative.
Dunn James M.
Yager Thomas D.
Torys Llp
Visible Genetics Inc.
LandOfFree
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