C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 5/077 (2010.01) A61K 48/00 (2006.01)
Patent
CA 2215244
A method of pretreating healthy donor's myoblast cultures with growth or trophic factors like basic fibroblast growth factor (bFGF) on transplantation to subjects suffering of myopathy like muscular dystrophy is disclosed and claimed. Recipient muscles show a higher percentage of functional cells, demonstrated by the higher incidence of dystrophin-positive fibers, and does not require previous preconditioning of recipient muscles by irradiation or toxin administration. Donor mouse myoblasts expressing the reporter gene .beta.--galactosidase were grown with 100 ng/ml bFGF during the last two days before injecting them in the left tibialis anterior (TA) muscles of recipient MHC-compatible mdx mice, an experimental animal model of muscular dystrophy. Myoblasts from the same primary cultures were also grown without bFGF and injected in the right TA muscles as control. The recipient mice were immunosuppressed with FK 506. Twenty-eight days after myoblast transplantation, the percentage of .beta.- galactosidase-positive fibers was significantly higher (more than a 4-fold increase) following culture with bFGF than without bFGF. Almost all .beta.-galactosidase-positive fibers were also dystrophin positive.
La présente invention concerne un procédé de traitement préalable de cultures de myoblaste de donneur sain. Ce procédé utilise des facteurs de croissance ou des facteurs trophiques, tels que le facteur de croissance de fibroblaste basique (bFGF), en cas de transplantation sur des sujets souffrant de dystrophie musculaire telle qu'une myopathie. Grâce à ce procédé, les muscles du receveur renferment une proportion plus élevée de cellules fonctionnelles, ce qui est attesté par une incidence plus importante des fibres dystrophino-positives, de sorte qu'il n'est pas nécessaire de préconditionner les muscles du receveur par irradiation ou administration de toxines. Des myoblastes de donneurs murins exprimant le gène marqueur beta -galactosidase ont été cultivés dans un milieu contenant du bFGF à raison de 100 ng/ml, pendant au moins les deux derniers jours précédant leur injection dans les muscles jambiers antérieurs (TA) gauches de souris receveuses, compatibles CMH, en l'occurrence des "mdx" ou "modèles animaux de la myopathie de Duchenne". Des myoblastes des mêmes cultures primaires ont été également cultivés sans bFGF et injectés en témoin dans les muscles jambiers antérieurs (TA) droits. Les souris receveuses ont subi un traitement immunodépresseur à base de FK 506. Vingt-huit jours après transplantation myoblastique, la proportion de fibres positives par rapport à la beta -galactosidase était considérablement supérieure (plus que quadruplée) après culture en milieu bFGF qu'après culture en milieu sans bFGF. Les fibres positives par rapport à la beta -galactosidase étaient également, dans leur quasi-totalité, dystrophino-positives.
Goudreau Gage Dubuc
Universite Laval
LandOfFree
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