C - Chemistry – Metallurgy – 07 – K
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
07
K
C07K 14/47 (2006.01) G01N 33/68 (2006.01)
Patent
CA 2492303
The invention relates to an in vitro method for inducing a conformational transition in proteins, whereas said conformational transition results in an increased content of .szlig.-sheet secondary structure, the method comprising the steps of: a) providing a conversion buffer; b) adding a solution of lamellar lipid structures that comprise negatively charged lipids to the conversion buffer; c) adding pro-tein molecules to the conversion buffer; d) forming a sample mixture from the conversion buffer, the added lipids and protein molecules; e) establishing a con-version temperature in the sample mixture; and f) exposing the sample mixture of step d) to the conversion temperature according to step e) for a time sufficient to form conformationally transitioned proteins. By this method water soluble complexes of lamellar lipidic structures and conformationally transitioned proteins are formed, the conformationally transitioned proteins being oligomeric .szlig.- sheet intermediate structures. Amyloidogenic aggregates may be produced of the water soluble complexes of lamellar lipidic structures and oligomeric .szlig.- sheet intermediate structures by actively destroying the lamellar lipid structures. Such proteins may be involved in neurodegenerative diseases like Transmissible Spongiform Encephalopathy (TSE), Alzheimers disease, Multiple Sclerosis and Parkinsons disease. The disclosure comprises the use of the proteins produced by the method, e.g., for exploiting the various aspects of the PrPC to PrPSc con-version; for the development of new diagnostic TSE-tests and potential therapeutics or prophylactics against TSE such as Creutzfeldt- Jakob disease in human.
L'invention concerne un procédé in vitro permettant d'induire une transition conformationnelle au sein de protéines, cette transition conformationnelle entraînant une augmentation de la quantité de structures secondaires de type feuillets .beta.. Ledit procédé comprend les étapes consistant à : a) fournir un tampon de conversion ; b) ajouter, à ce tampon de conversion, une solution de structures lipidiques lamellaires comprenant des lipides chargés négativement ; c) ajouter des molécules de type protéines audit tampon de conversion ; d) former un mélange échantillon à partir du tampon de conversion, des lipides ajoutés et des molécules de type protéines ; e) établir une température de conversion dans le mélange échantillon ; et f) exposer le mélange échantillon obtenu au cours de l'étape d) à la température de conversion établie au cours de l'étape e) pendant un laps de temps suffisamment long pour former des protéines à transition conformationnelle. Le procédé selon l'invention permet de former des complexes hydrosolubles de structures lipidiques lamellaires ainsi que des protéines à transition conformationnelle, ces dernières se présentant sous la forme de structures intermédiaires oligomères de feuillets .beta.. Des agrégats amyloïdogéniques peuvent être produits à partir des complexes hydrosolubles de structures lipidiques lamellaires et des structures intermédiaires oligomères de feuillets .beta., par destruction active des structures lipidiques lamellaires. De telles protéines peuvent être impliquées dans des maladies neurodégénératives telles qu'une encéphalopathie spongiforme transmissible (TSE), la maladie d'Alzheimer, la sclérose en plaques et la maladie de Parkinson. La présente invention se rapporte en outre à l'utilisation des protéines produites selon ledit procédé, par ex. pour exploiter les divers aspects de la conversion PrP<SP>C</SP> en PrP?Sc¿ et pour développer de nouvelles épreuves diagnostiques de la TSE ainsi que des substances pouvant traiter ou prévenir une TSE telle que la maladie de Creutzfeldt-Jakob chez un être humain.
Luehrs Thorsten
Zahn Ralph
Eidgenoessische Technische Hochschule Zuerich
Marks & Clerk
LandOfFree
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