Method for monitoring t-cell reactivity

Details Method for monitoring t-cell reactivity Method for monitoring t-cell reactivity

G - Physics

01

N

G01N 33/543 (2006.01) C12Q 1/02 (2006.01) G01N 33/50 (2006.01) G01N 33/554 (2006.01) G01N 33/564 (2006.01)

Patent

CA 2256693

This invention provides a highly sensitive assay for the detection of T-cells reactive to an antigen by detecting a soluble factor whose secretion is induced by stimulation of the T-cell by the antigen. The assay includes an antigen-driven proliferation of specific T-cells prior to restimulation with irradiated antigen presenting cells (APCs) and antigen. In exemplary embodiments, the assay is used to enhance the detection limits of human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) secreting interferon-.gamma. (IFN- .gamma.) and interleukin-2 (IL-2). The assay can be performed on previously frozen PBMCs, providing greater convenience in sample processing, multiple use of a single sample as an internal standard, and simultaneous analysis of samples collected at different time points.

La présente invention concerne un procédé de dosage hautement sensible permettant de détecter des lymphocytes T réagissant à un antigène, lequel dosage se fait par détection d'un facteur soluble dont la sécrétion est induite par la stimulation qu'exerce l'antigène sur le lymphocyte T. Ce dosage consiste en une prolifération provoquée par antigène de lymphocytes T spécifiques préalablement à une restimulation au moyen, non seulement de cellules irradiées présentant l'antigène (APC = Antigen Presenting Cells), mais aussi de l'antigène. Selon certaines réalisations, le dosage sert à augmenter les limites de détection des cellules mononucléaires du sang périphérique (PBMC = Peripheral Blood Mononuclear Cells) humain sécrétant l'interféron-.gamma. (IF-.gamma.) et l'interleukine-2 (IL-2). Le dosage peut se faire sur des PBMC préalablement congelées, ce qui permet plus de souplesse concernant le traitement des échantillons, l'utilisation multiple d'un même échantillon comme référence interne, et l'analyse simultanée d'échantillons prélevés à différents moments.

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