C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) C12P 19/34 (2006.01) C12Q 1/70 (2006.01)
Patent
CA 2145533
A method for amplifying a target nucleic acid sequence by providing a polynucleotide such as VII including the sequence to be amplified as well as an RNA polymerase promoter sequence, and contacting said polynucleotide, in the presence of a system having RNA polymerase activity, RNA-dependent DNA polymerase activity, and DNA-dependent DNA polymerase activity, and capable of strand displacement, with a set of primers includinf a primer such as A capable of hybridising with a segment complementary to a portion of the sequence to be amplified, wherein A includes an upstream RNA polymerase promoter sequence then an arbitrary sequence, a primer such as D contains said RNA polymerase promoter sequence, and a primer such as C contains said arbitrary sequence. The elongation product of D is displaced by the elongation product of C, and the elongation product of D is thus obtained in the form of single-stranded VIII. Hybridisation of A on VIII followed by elongation forms double-stranded product X which can undergo transcription, with amplification, to give single-stranded RNA VII bis. An analogous system of 3 primers B, E and F similary produces single-stranded RNA VII from VII bis. Hence the amplification method, which can operate isothermally, is cyclic.
Procédé d'amplification d'une séquence d'acide nucléique cible consistant essentiellement à obtenir un polynucléotide tel que VII comprenant la séquence à amplifier et comprenant en outre la séquence d'un promoteur d'ARN polymérase, et à mettre en contact ce polynucléotide, en présence d'un système ayant une activité d'ARN polymérase, une activité d'ADN polymérase ARN-dépendante et une activité d'ADN polymérase ADN-dépendante, et ayant une capacité de déplacement de brins, avec un ensemble d'amorces comprenant une amorce telle que A capable de s'hybrider avec un segment complémentaire d'une partie de la séquence à amplifier. A comprenant en amont une séquence de promoteur d'ARN polymérase puis une séquence arbitraire, une amorce telle que D contenant ladite séquence de promoteur d'ARN polymérase, et une amorce telle que C comprenant ladite séquence arbitraire. Le produit d'élongation de D est déplacé par le produit d'élongation de C, et on obtient donc le produit d'élongation de D sous forme de monobrin VIII. L'hybridation de A sur VIII, suivie d'élongation, conduit su produit double brin X dont la transcription conduit, avec amplification, notamment à l'ARN simple brin VII bis. Un système analogue de 3 amorces B, E et F conduit de façon similaire, à partir de VII bis, à l'ARN simple brin VII, d'où le caractère cyclique de ce procédé d'amplification capable de fonctionner de façon isotherme.
Cleuziat Philippe
Guillou-Bonnici Francoise
Levasseur Pierre
Mallet Francois
Bio Merieux
Robic
LandOfFree
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