Method for polynucleotide sequencing

C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q

Patent

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Details

C12Q 1/68 (2006.01)

Patent

CA 2258511

The present invention is a method of sequencing polynucleotides by sequential step sequencing. Sequential step sequencing begins with a single-stranded polynucleotide template that is annealed with a primer forming a primer- template complex. In one embodiment of the method, one labeled nucleotide at a time is added to the primer-template complex. Alternatively, this method can be used with a nucleotide or nucleotide analog that does not stop addition after a first nucleotide or nucleotide analog has been added to the primer. Other embodiments of the invention involve identification of polynucleotides having a contiguous non-redundant string or a superimposed non-redundant string pattern. The detection of a non-redundant contiguous string can be used to identify a particular gene. Alternatively, if the non-redundant contiguous string is not unique to a particular gene, the string can be used to form a DNA library that can then be searched with a second string. Similarly, a superimposed non-redundant string pattern can be used to identify a gene or to search a DNA library. Such strings can be used in annealing reactions and in computer searches of a database having a catalog of sequenced polynucleotides.

La présente invention se rapporte à un procédé de séquençage de polynucléotides mettant en oeuvre un séquençage séquentiel progressif. Ledit procédé consiste tout d'abord à circulariser une matrice de polynucléotides simple brin avec une amorce de façon à former un complexe matrice-amorce. Selon une réalisation, le procédé de l'invention permet d'ajouter un nucléotide marqué à la fois audit complexe matrice-amorce. On peut également mettre en oeuvre ledit procédé avec un nucléotide ou un analogue de nucléotide qui n'arrête pas l'addition après qu'un premier nucléotide ou un premier analogue de nucléotide ait été ajouté à l'amorce. L'invention se rapporte également à des procédés qui consistent à identifier des polynucléotides comportant une séquence à segments contigus non répétitifs ou à segments superposés non répétitifs. La détection d'un segment contigu non répétitif peut servir, par exemple, à identifier un gène particulier. Dans le cas où le segment contigu non répétitif n'est pas associé de manière unique à un gène particulier, le segment peut servir à la création d'une banque génomique qui peut, par la suite, être explorée, par exemple à l'aide d'un second segment. De la même manière, il est possible d'utiliser une séquence de segments superposés non répétitifs pour, par exemple, identifier un gène ou pour explorer une banque génomique. On peut utiliser ces segments pour, par exemple, effectuer des réactions de circularisation et pour explorer informatiquement une base de données comportant un catalogue de polynucléotides séquencés.

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