Method for purifying erythropoietin

C - Chemistry – Metallurgy – 07 – K

Patent

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Details

C07K 14/505 (2006.01) C07K 1/16 (2006.01) C07K 1/18 (2006.01) C07K 1/20 (2006.01) C07K 1/22 (2006.01)

Patent

CA 2569465

The invention relates to a method for producing recombined erythropoietin having a particularly high degree of purity (>= 98 %). The method consists of at least 5 chromatographic purification steps, i.e. at least two anion exchange chromatographs, at least one hydrophobic interaction chromatography, at least one affinity chromatography and at least one hydroxyapatite chromatography. In preferred embodiments, the method does not require any exclusion chromatography and any reversed-phase chromatography. The invention relates to, in particular, a method wherein the following chromatographic purification steps have the following order; i) a first anion exchange chromatography, ii) an affinity chromatography, which relates, preferably, to a dye affinity chromatography, iii) a hydrophobic interaction chromatography, iv) an hydroxyapatite chromatography and v) a second anion exchange chromatography.

L'invention concerne un procédé servant à produire de l'érythropoïétine recombinante qui présente un degré de pureté particulièrement élevé (= 98 %). Le procédé selon l'invention comprend au moins 5 étapes de purification chromatographiques, à savoir au moins deux chromatographies d'échange d'anions, au moins une chromatographie d'interaction hydrophobe, au moins une chromatographie d'affinité et au moins une chromatographie sur hydroxyapatite. Selon des modes de réalisation préférés, le procédé selon l'invention renonce à toute chromatographie d'exclusion et à toute chromatographie de partage à polarité de phases inversée. L'invention concerne notamment un procédé comprenant les étapes de purification chromatographiques suivantes dans l'ordre suivant : i) une première chromatographie d'échange d'anions, ii) une chromatographie d'affinité, qui est de préférence une chromatographie d'affinité tinctoriale, iii) une chromatographie d'interaction hydrophobe, iv) une chromatographie sur hydroxyapatite et v) une deuxième chromatographie d'échange d'anions.

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