C - Chemistry – Metallurgy – 07 – K
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
07
K
C07K 14/805 (2006.01) C07K 1/18 (2006.01)
Patent
CA 2336808
A method for producing a purified hemoglobin product includes loading a hemoglobin solution onto an anion exchange chromatography column. At least one tris(hydroxymethyl) aminomethane acetate buffer solution is injected into the column. The buffer solution has a pH lower than that of the column, whereby a purified hemoglobin product elutes from the column. In one embodiment, the hemoglobin solution initially can be equilibrated at a pH of greater than about 8.7. In another embodiment, contaminants can be removed by equilibrating the column with at least about eleven column void volumes of buffer solution at an intermediate pH of between about 8.2 and about 8.6, to thereby form a stepped pH gradient. In still another embodiment, all buffer solutions employed are tris(hydroxymethyl) aminomethane acetate.
Cette technique de production de produit d'hémoglobine consiste à charger une colonne de chromatographie par échange d'anions d'une solution d'hémoglobine. On injecte au moins une solution tampon de tris (hydroxyméthyl) amino-méthane acétate dans cette colonne. Le pH de cette solution tampon est inférieur à celui de la colonne, ce qui permet d'éluer un produit d'hémoglobine purifié. Dans un mode de réalisation, la solution d'hémoglobine peut être initialement équilibrée à un pH supérieur à 8,7. Dans un autre mode de réalisation, il est possible d'enlever des contaminants par équilibrage de la colonne à l'aide d'au moins onze volumes vides de colonne d'une solution tampon ayant un pH intermédiaire compris entre 8,2 et 8,6, de manière à donner lieu à un gradient de pH étagé. Dans un autre mode de réalisation, toutes les solutions tampon employées sont constituées de tris(hydroxyméthyl) amino-méthane acétate.
Houtchens Robert A.
Rausch Carl W.
Biopure Corporation
Gowling Lafleur Henderson Llp
LandOfFree
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