C - Chemistry – Metallurgy – 07 – K
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
07
K
C07K 1/16 (2006.01) C07K 14/205 (2006.01) A61K 39/00 (2006.01)
Patent
CA 2436889
The invention concerns a method for purifying the Helicobacter adhesin-like protein A (AlpA) which consists in: (i) contacting an AlpA preparation and 2.5 to 3.5 M of guanidine with a hydrophobic interaction chromatography material, so that the AlpA is adsorbed on the material; and (ii) eluting the AlpA with a solution containing 3.5 to 4.5 M of guanidine. The AlpA preparation to be purified can be in particular derived from an E. coli culture capable of expressing AlpA in a high-level recombinant form, rAlpA being in the form of inclusion bodies, the latter being recovered and solubilized in the presence of guanidine, and optionally ammonium sulphate-precipitated for the purpose of preliminary purification. The hydrophobic interaction chromatography can be followed up by an anion exchange chromatography in the presence of 8 M of urea.
L'invention a pour objet un procédé de purification de la protéine adhésine-like A (AlpA) d'Hélicobacter selon lequel: (i) on met en contact une préparation AlpA et 2,5 à 3,5 M de guanidine avec un matériel de chromatographie d'interactions hydrophobes (CIH), de telle sorte qu'AlpA s'adsorbe sur le matériel; et (ii) on élue AlpA avec une solution contenant 3,5 à 4,5 M de guanidine. La préparation d'AlpA destinée à être purifiée peut être notamment issue d'une culture d'E. coli, capable d'exprimer AlpA sous forme recombinante à un niveau élevé. rAlpA se présentant sous forme de corps d'inclusion, ces derniers sont récupérés et solubilisés en présence de guanidine, et éventuellement précipités au sulfate d'ammonium à des fins de purification préliminaire. La purification par CIH peut être poursuivie notamment par une chromatographie échangeuse d'anions en présence d'urée 8 M.
Fourrichon Laurence
Lissolo Ling
Pitiot Olivier
Merieux Oravax
Robic
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1399114