C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2568537
The present invention provides a method for quantitative and/or comparative assessment of the relative amounts of mRNA transcripts present in a cell or tissue sample. In the method reverse transcription of the mRNA contained in the sample is first carried out using sequence-modifying primers for one or several genes in the same reaction to obtain a pool of sequence-modified cDNA molecules. After completion of the reverse transcription redundant sequence- modifying primers are removed or inactivated. This step is followed by a step of co-amplifying the sequence-modified cDNA templates with a reference DNA template in individual gene-specific amplification reactions. By quantitatively measuring the amounts and determining the relative levels of the amplification products derived from sequence-modified cDNA and reference DNA templates, a gene-specific cDNA over DNA ratio is obtained in each of the individual amplification reactions. Finally, by combining the ratios obtained, a sample-specific profile can be generated, which reflects the relative amounts of mRNA transcripts originally present in the sample.
La présente invention porte sur une méthode d'évaluation quantitative et/ou comparative des quantités relatives des produits de transcription de l'ARNm présents dans un échantillon cellulaire ou tissulaire. On effectue d'abord un procédé de transcription inverse de l'ARNm contenu dans l'échantillon en utilisant des amorces modifiant les séquences d'un ou plusieurs gènes de la même réaction afin d'obtenir un pool de molécules d'ADNc modifiées par les séquences. Après achèvement de la transcription inverse, les amorces redondantes modifiant les séquences sont retirées ou désactivées. Cette étape est suivie d'une étape de co-amplification des gabarits d'ADNc modifiés par les séquences avec un gabarit d'ADN de référence dans des réaction individuelles d'amplification spécifiques d'un gène. En mesurant quantitativement les quantité et en déterminant les niveaux relatifs des produits d'amplification dérivés de l'ADNc modifié par les séquences et les gabarits d'ADN de référence, on obtient un ADNc spécifique d'un gène sur un rapport d'ADN dans chacune des réactions d'amplification individuelles. Enfin, en combinant les rapports obtenus, on peut générer un profil spécifique d'un échantillon qui correspond aux quantités relatives des produits de transcription de l'ARNm présents à l'origine dans l'échantillon.
Orpana Arto
Paju Annukka
Rissanen Oso
Stenman Jakob
Mccarthy Tetrault Llp
Orpana Arto
Paju Annukka
Rissanen Oso
Stenman Jakob
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Profile ID: LFCA-PAI-O-1923742