C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C07H 21/02 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01)
Patent
CA 2535332
Alternatively spliced RNA, along with their normally-spliced counterparts, can be rapidly identified by hybridizing cDNA from normal tissue to cDNA from an abnormal or test tissue. The two cDNA populations are separately tagged prior to hybridization, which allows isolation of double-stranded cDNA containing both normal and alternatively spliced molecules. Within this population, pairing of cDNA molecules representing an alternatively spliced mRNA with cDNA molecules representing the counterpart normally spliced mRNA will form double- stranded cDNA with single-stranded mismatched regions. The mismatched double- stranded cDNA are isolated with reagents that bind single-stranded nucleic acids. The strands of each mismatched double-stranded cDNA are then coupled and analyzed, simultaneously identifying both normal and alternatively spliced molecules.
Selon l'invention, l'ARN épissé, conjointement avec ses homologues épissés normalement, peut être identifié rapidement par hybridation d'ADNc à partir de tissu normal, en ADNc à partir d'un tissu anormal ou d'un tissu test. Les deux populations d'ADNc sont étiquetées séparément avant hybridation, ce qui permet d'isoler l'ADNc double brin contenant à la fois des molécules épissées normalement et des molécules épissées de manière alternée. Dans cette population, l'appariement de molécules d'ADNc représentant un ARNm épissé de manière alternée avec des molécules d'ADNc représentant l'ARNm homologue épissé normalement donne lieu à un ADNc double brin avec des régions simple brin non appariées. L'ADNc double brin non apparié est isolé avec des réactifs qui lient les acides nucléiques simple brin. Les brins de chaque ADNc double brin non apparié sont ensuite couplés et analysés, ce qui permet simultanément d'identifier à la fois les molécules épissées normalement et les molécules épissées de manière alternée.
Mccarthy Tetrault Llp
Thomas Jefferson University
LandOfFree
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