C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01) C12N 1/06 (2006.01) G01N 27/447 (2006.01)
Patent
CA 2428313
Disclosed is a method for rapidly typifying yeasts, parasites and bacteria. The method involves the following steps: a) Preparing intact and immobilized DNA within 5 to 60 minutes by means of a method which uses a set of reagents that only contains a buffer solution, a detergent, a chelating agent and an agent that breaks up the hydrogen bridges. b) Separating intact DNA molecules or their restriction fragments using pulsed field electrophoresis mini- equipment of systems CHEF (Contour Clamped Homogeneous Electric Field) and TAFE (Transversal Alternating Field Electrophoresis) for time periods ranging between 2.5 and 7 hours. c) Selecting the optimal conditions that will be applied in the miniCHEF by using a method simulating a priori the electrophoretic patterns that would be obtained in said gels. d) Providing the reorientation times, migration speeds and molecule sizes without using size markers but using a method that analyzes migrated distances.
L'invention concerne un procédé de caractérisation rapide de levures, de parasites et de bactéries. Ce procédé consiste a) à préparer, dans un laps de temps compris entre 5 et 60 minutes, un ADN intact et immobilisé selon une méthode utilisant un jeu de réactifs contenant uniquement une solution tampon, un détergent, un agent chélatant et un agent rompant les liaisons hydrogène, b) à séparer les molécules d'ADN intactes ou leurs fragments de restriction à l'aide des mini-équipements d'électrophorèse en champs pulsés des systèmes CHEF (champs alternés homogènes fixés) et TAFE (Transversal Alternating Field Electrophoresis) durant des laps de temps compris entre 2,5 et 7 heures, c) à sélectionner les conditions optimales à appliquer dans le système miniCHEF à l'aide d'une méthode permettant de simuler, <i>a priori</i>, les diagrammes électrophorétiques pouvant être obtenus dans lesdits gels, d) à appliquer les temps de réorientation, les vitesses de migration et les dimensions des molécules sans utiliser de marqueurs de tailles, et à utiliser une méthode permettant d'analyser les distances de migration.
Arencibia Diaz Oscar
Ariosa Acuna Maria Concepcion
Clark Donderiz Hilda Teresa
Gigato Perez Regnar
Higgison Clarke David
Centro Nacional de Investigaciones Cientificas (cnic)
Macrae & Co.
LandOfFree
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