C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/68 (2006.01)
Patent
CA 2401650
Disclosed are compositions and methods useful for reducing the formation of artifacts during nucleic acid amplification reactions. The method uses special oligonucleotides, referred to herein as template-deficient oligonucleotides, that cannot serve as a template for nucleic acid synthesis over part of their length. This prevents the oligonucleotides from serving as effective templates in the formation of artifacts. The disclosed method involves using a template- deficient oligonucleotide as at least one of the oligonucleotides (preferably a primer) in a nucleic acid amplification reaction, where the template- deficient oligonucleotide comprises one or more template-deficient nucleotides, preferably at or near the 5' end of the template-deficient oligonucleotide. The disclosed method is useful for reducing artifacts in any nucleic acid amplification reaction involving oligonucleotides. In a preferred form of the method the nucleic acid amplification reaction does not involve thermal cycling. The disclosed method is effective at reducing non-cycle oligonucleotide-based artifacts. Also disclosed are kits useful for reducing artifacts in nucleic acid amplification reactions. The disclosed kits include a template-deficient oligonucleotide, wherein the template-deficient oligonucleotide comprises one or more template-deficient nucleotides, and a nucleic acid polymerase.
L'invention concerne des compositions et des procédés utiles pour réduire la formation d'artefacts pendant des réactions d'amplification d'acide nucléique. Le procédé utilise des oligonucléotides spéciaux, appelés ici oligonucléotides à déficience matricielle, lesquels ne peuvent servir de matrice pour la synthèse d'acide nucléique sur une partie de leur longueur. Ceci empêche que les oligonucléotides ne servent de matrices efficaces dans la formation d'artefacts. Le procédé décrit consiste à utiliser un oligonucléotide à déficience matricielle au moins en tant qu'un des oligonucléotides (de préférence une amorce) dans la réaction d'amplification d'acide nucléique, dans laquelle l'oligonucléotide à déficience matricielle comprend un ou plusieurs nucléotides à déficience matricielle, de préférence au niveau ou près de l'extrémité 5' de l'oligonucléotide à déficience matricielle. Le procédé décrit est utile pour réduire les artefacts dans n'importe quelle réaction d'amplification d'acide nucléique impliquant des oligonucléotides. Dans une forme préférée du procédé, la réaction d'amplification d'acide nucléique n'implique pas de cyclage thermique. Le procédé décrit est efficace pour réduire les artefacts basés sur des oligonucléotides sans cycle. L'invention concerne également des matériels utiles pour réduire les artefacts dans des réactions d'amplification d'acide nucléique. Les matériels décrits comprennent un oligonucléotide à déficience matricielle, l'oligonucléotide à déficience matricielle comprenant un ou plusieurs nucléotides à déficience matricielle, et une polymérase d'acide nucléique.
Dean Frank B.
Faruqi A. Fawad
Molecular Staging Inc.
Qiagen Gmbh
Smart & Biggar
LandOfFree
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Profile ID: LFCA-PAI-O-2022892