A - Human Necessities – 01 – H
Patent
A - Human Necessities
01
H
A01H 4/00 (2006.01)
Patent
CA 2221610
The invention is a method for reproducing coniferous trees by somatic embryogenesis using plant tissue culture techniques in a multistage culturing process. A suitable explant, typically the fertilized embryo excised from an immature seed, is first cultured on a medium that induces multiple early stage proembryos. These are multiplied in a second culture having reduced growth hormones. Maltose is supplied as the carbon and energy source in the second culture. Alternatively, a sucrose-containing maintenance and multiplication medium may be used followed by at least two subcultures on a maltose based maintenance medium. The early stage embryos grow in size and vigor to advanced early stage embryos. The embryos are then transferred to a cotyledonary embryo development culture. After several weeks somatic embryos having the appearance of zygotic embryos will have formed. These may be germinated before or after storage and transplanted to soil for further growth. Maltose used in the maintenance and multiplication culture results in larger and more robust advanced early stage embryos which, in turn, produce cotyledonary embryos very similar in morphology to natural zygotic embryos. The use of maltose at earlier stages of embryo development is more important than its use for embryo maturation.
Procédé de reproduction de conifères par embryogenèse somatique au moyen de techniques de culture de tissus végétaux dans un procédé de culture à étapes multiples. Un explant adapté, généralement l'embryon fertilisé prélevé par excision sur une graine immature, est d'abord mis en culture sur un milieu qui permet la production de multiples pré-embryons à un stade précoce. Ces derniers sont multipliés dans une deuxième culture avec des hormones de croissance réduites. Du maltose est apporté, comme source de carbone et d'énergie, dans la deuxième culture. En variante, un milieu de conservation et de multiplication contenant du saccharose peut être utilisé, au moins deux sous-cultures sur un milieu de conservation à base de maltose étant effectuées ensuite. Les embryons à un stade précoce croissent en dimension et en force pour devenir des embryons à un stade précoce avancés. Les embryons sont ensuite transférés dans une culture d'embryons cotylédonaires. Après plusieurs semaines, des embryons somatiques présentant l'apparence d'embryons zygotiques se seront formés. Ceux-ci peuvent germer avant ou après le stockage et être transplantés dans le sol pour poursuivre leur croissance. Le maltose utilisé dans la culture de conservation et de multiplication permet d'obtenir des embryons à un stade précoce plus gros et plus robustes, qui à leur tour produisent des embryons cotylédonaires très semblables en morphologie aux embryons zygotiques naturels. L'utilisation du maltose dans les premiers stades du développement des embryons est plus importante que son utilisation pour la maturation des embryons.
Gupta Pramod K.
Smart & Biggar
Weyerhaeuser Company
Weyerhaeuser Nr Company
LandOfFree
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