A - Human Necessities – 01 – H
Patent
A - Human Necessities
01
H
A01H 4/00 (2006.01)
Patent
CA 2167500
The invention is a method for reproducing conniferous trees by somatic embryogenesis using plant tissue culture techniques in a multistage culturing process. A suitable explant, typically the fertilized embryo excised from an immature seed, is first cultured on a medium that induces multiple early stage proembryos. These are multiplied in a second culture having reduced growth hormones. The early stage embryos may then be placed in or on a late stage proembroyo development culture in order to develop very robust late stage proembryos having at least 100 cells. Culturing from this point continues in a cotyledonary embryo development medium containing an active gibberellin (GA) in an amount up to about 50 mg/L. Preferably exogenous abscisic acid (ABA) is also present in a similar amount. Concentration of GA and ABA may be reduced over time by inclusion of an adsorbent such as activated charcoal or by stepwise subcultures in which the later cultures have reduced hormone concentrations. After several weeks somatic embryos having the appearance of zygotic embryos will have formed. These may be germinated before or after storage and transplanted to soil for further growth. In addition to its use in the cotyledonary embryo development stage, GA may also be advantageously included in any of the maintenance cultures following embryo initiation. The use of GA results in larger and more robust somatic embryos and ultimately in greater germination success.
L'invention concerne un procédé de reproduction de conifères par embryogenèse somatique à l'aide de techniques de culture tissulaire végétale dans un processus de culture en plusieurs étapes. Un explant approprié, généralement l'embryon fécondé excisé d'une graine immature, est d'abord mis en culture sur un milieu qui induit plusieurs proembryons à un stade précoce. Ceux-ci sont multipliés dans une seconde culture possédant un niveau réduit d'hormones de croissance. Les embryons à un stade précoce peuvent ensuite être placés dans ou sur une culture de développement proembryonnaire à un stade tardif afin de développer des proembryons à un stade tardif très robustes possédant au moins 100 cellules. A partir de là, la culture se poursuit dans un milieu de développement d'embryons à cotylédonés contenant une gibbérelline active (GA) en une quantité allant jusqu'à environ 50 mg/L. De préférence, l'acide abscisique (ABA) exogène est également présent en une quantité similaire. La concentration de GA et de ABA peut être réduite dans le temps par inclusion d'un absorbant tel que le charbon activé ou par des sous-cultures par étapes dans lesquelles les cultures suivantes ont des concentrations d'hormones réduites. Au bout de plusieurs semaines, les embryons somatiques ayant l'apparence d'embryons zygotiques seront formés. Ceux-ci peuvent être placés en germination avant ou après stockage et transplantés dans le sol en vue d'un développement ultérieur. Hormis son utilisation dans l'étape de développement d'embryons cotylédonés, la GA peut être également incluse de manière bénéfique dans n'importe laquelle des cultures d'entretien après l'apparition de l'embryon. L'utilisation de GA donne naissance à des embryons somatiques plus grands et plus robustes, et finalement à un plus grand succès de germination.
Gupta Pramod K.
Pullman Gerald S.
Smart & Biggar
Weyerhaeuser Nr Company
LandOfFree
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