C - Chemistry – Metallurgy – 12 – Q
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
Q
C12Q 1/37 (2006.01) C07K 14/18 (2006.01) G01N 33/573 (2006.01) G01N 33/576 (2006.01)
Patent
CA 2182521
This is a method for reproducing in vitro the serine protease activity associated with the HCV NS3 protein, that comprises the use both of sequences contained in NS3 and sequences contained in NS4A. This method takes advantage of the ability of the HCV NS4A protein, or sequences contained therein, to act as a cofactor of the serine protease activity or more generally of the enzymatic activities associated with NS3. Optimal serine protease activity is obtained when NS4A is present in a molar ratio of at least 1:1 with NS3, NS3 and NS4A can also be incorporated in the reaction mixture as NS3-NS4A precursor, at this precursor will generate, by means of an autoproteolytic event, equimolar amounts of NS3 and NS4A. It is also possible to mutate the cleavage site between NS3 and NS4A in a precursor, so that NS4A remains covalently bonded to NS3. The sequences that do not influence the proteolytic activity of NS3 can subsequently be removed from said non-proteolyzable precursor. The invention also relates to a composition of matter that comprises sequences contained in NS3 and NS4A, and to the use of these compositions for the setup of an enzymatic test capable of selecting, for therapeutic purposes, compounds that inhibit the enzymatic activity associated with NS3. The figure shows plasmidic vectors used in the method to activate HCV NS3 protease in cultivated cells and in vitro.
Procédé de reproduction in vitro de l'activité de sérine protéase associée à la protéine NS3 du virus de l'hépatite C (VHC), consistant à exploiter les deux séquences comprises dans la NS3 et les séquences comprises dans la protéine NS4A. Ce procédé met à profit l'aptitude de la protéine NS4A du VHC, ou des séquences comprises dans celle-ci, à servir de cofacteur de l'activité de sérine protéase ou plus généralement des activités enzymatiques associées à la NS3. On obtient une activité de sérine protéase optimisée lorsque la NS4A est présente selon un rapport molaire d'au moins 1:1 par rapport à la NS3. On peut également incorporer au mélange réactionnel la NS3 et la NS4A sous forme de précurseur NS3-NS4A, car ce précurseur produira, grâce à une autoprotéolyse, des quantités équimolaires de NS3 et de NS4A. En outre, on peut réaliser une mutation du site de clivage entre la NS3 et la NS4A dans un précurseur, afin de conserver la liaison covalente entre la NS4A et la NS3. Par la suite, on peut éliminer de ce précurseur non protéolysable les séquences qui n'influent pas sur l'activité protéolytique de la NS3. On a également prévu une composition de matières comportant des séquences comprises dans la NS3 et la NS4A, ainsi que l'utilisation de ces compositions dans l'élaboration d'un test enzymatique permettant la sélection, dans un but thérapeutique, de composés inhibant l'activité enzymatique associée à la NS3. La figure représente des vecteurs plasmidiques utilisés dans le procédé en vue d'activer la protéase NS3 du VHC dans les cellules cultivées et in vitro.
de Francesco Raffaele
Failla Cristina
Tomei Licia
Fetherstonhaugh & Co.
Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.p.a.
LandOfFree
Method for reproducing in vitro the proteolytic activity of... does not yet have a rating. At this time, there are no reviews or comments for this patent.
If you have personal experience with Method for reproducing in vitro the proteolytic activity of..., we encourage you to share that experience with our LandOfFree.com community. Your opinion is very important and Method for reproducing in vitro the proteolytic activity of... will most certainly appreciate the feedback.
Profile ID: LFCA-PAI-O-1899568