C - Chemistry – Metallurgy – 12 – N
Patent
C - Chemistry, Metallurgy
12
N
C12N 9/12 (2006.01) C12Q 1/48 (2006.01) C12Q 1/70 (2006.01)
Patent
CA 2220873
This is a method for reproducing in vitro the RNA-dependent RNA polymerase activity associated with hepatitis C virus. The method is characterized in that sequences contained in NS5B are used in the reaction mixture. The terminal nucleotidyl transferase activity, a further property of the NS5B protein, can also be reproduced using this method. The method takes advantage of the fact that the NS5B protein, either purified to apparent homogeneity or present in extracts of overproducing organisms, can catalyse the addition of ribonucleotides to the 3'-termini of exogenous or endogenous RNA molecules. The invention also relates to a composition of matter that comprises sequences contained in NS5B, and to the use of these compositions for the set up of an enzymatic test capable of selecting, for therapeutic purposes, compounds that inhibit the enzymatic activity associated with NS5B. The figure shows plasmids used in the method to produce hepatitis C virus RNA-dependent RNA polymerase and terminal nucleotidyl transferase in cultivated eukaryotic and prokaryotic cells.
Procédé de reproduction in vitro de l'activité de l'ARN-polymérase ARN-dépendante liée au virus de l'hépatite C. Ce procédé est caractérisé par le fait que des séquences contenues dans la protéine NS5B sont utilisées dans le mélange de réaction. L'activité de la nucléotidyl-transférase terminale, autre propriété de la protéine NS5B, peut également être reproduite par ce procédé. Le procédé tire parti du fait que la protéine NS5B, soit purifiée jusqu'à un état d'homogénéité apparente, soit présente dans des extraits d'organismes en produisant en excès, peut catalyser l'addition de ribonucléotides aux terminaisons 3' de molécules d'ARN exogènes ou endogènes. L'invention porte aussi sur une composition de matière qui comporte des séquences contenues dans la protéine NS5B, et sur l'utilisation de ces compositions pour la mise en oeuvre d'un essai enzymatique capable de sélectionner, à des fins thérapeutiques, des composés inhibant l'activité enzymatique liée à la NS5B. La figure représente des plasmides utilisés selon ce procédé pour produire l'ARN-polymérase ARN-dépendante du virus de l'hépatite C et la nucléotidyl-transférase terminale dans des cellules eucaryotes et procaryotes cultivées.
Behrens Sven-Erik
de Francesco Raffaele
Tomei Licia
Fetherstonhaugh & Co.
Istituto Di Ricerche Di Biologia Molecolare P. Angeletti S.p.a.
LandOfFree
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